[发明专利]酪酸梭菌在制备预防或治疗胆管癌制剂中的应用

说明书

本发明公开了酪酸梭菌在制备预防或治疗胆管癌制剂中的应用，具体是用酪酸梭菌为主要活性成分，制成药品等生物制剂，在预防或治疗胆管癌中的应用，属于生物医药领域。

技术领域

本发明涉及酪酸梭菌在制备预防或治疗胆管癌制剂中的应用，具体是用酪酸梭菌预防或治疗胆管癌，属于生物医药领域。

背景技术

胆管癌作为常见的胆道恶性肿瘤，是继肝癌之后的第二大原发性肝胆恶性肿瘤，由于其解剖位置，生长特点以及缺少确切的诊断标准使其早期诊断困难，而临床症状的不明显及有限的治疗手段，使得其预后极差。

近几年胆管癌的发病率逐年升高，手术切除是治疗胆管癌的首选方法，但由于胆管癌多病灶、伴有淋巴结转移、腹膜及远处转移，手术病人长期存活率仍不理想，大多数患者被确诊时已处于癌症晚期，所以5年生存率低于10％，并且大约80％的胆管癌由于转移或进展期只能行姑息治疗，现有治疗药物效果也不理想。

本发明人经过研究发现，酪酸梭菌能够有效预防或治疗胆管癌，安全没有任何毒副作用，效果优于双歧杆菌，且未见相关研究报道，特申请此发明专利。

发明内容

本发明的目的是提供一种能预防或治疗胆管癌的制剂，该制剂由酪酸梭菌制成。

本发明的制剂的制备优选是通过下述步骤实施的，但不局限于此制备工艺，公知的能实现的制备工艺均可以：采取可能含酪酸梭菌的样品，然后将样品置于灭菌厌氧瓶内，吹入氮气同时充分混合，迅速从中取2克样品加入18mL灭菌的稀释液中，吹入氮气同时充分混匀，在无菌操作台内，进行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，10^-5，10^-6，10^-7梯度稀释，取10^-5，10^-6，10^-7三个稀释梯度，分别涂布于酪酸梭菌选择性单菌落分离固体培养基上，置于厌氧罐内，厌氧37℃下培养48小时，选择长势良好的单菌落分别接种于液体扩增培养基中，置于厌氧罐内，厌氧37℃下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm)分离出菌体后，将菌体冷冻真空干燥，调制出干燥菌粉，然后进行菌种鉴定和毒性试验，将鉴定为酪酸梭菌的干燥菌粉按需要比例添加辅料制成片剂、胶囊、散剂、粉剂或液体制剂等各种剂型，也可加入其他活菌或低聚果糖等低聚糖起到协同作用。

酪酸梭菌选择性单菌落分离固体培养基优选但不局限于：纯化水1L，蛋白胨40.0g，Na₂HPO₄ 5.0g，K₂HPO₄ 1.0g，NaCl 2.0g，MgSO₄ 0.1g，葡萄糖2.0g，琼脂25.0g，调pH7.6，116℃灭菌20分钟，待其冷至50℃左右，加入卵黄液50.0mL，加入终浓度为200μg/mL的硫酸多粘菌素B，加入终浓度200μg/mL的新霉素，充分混匀后，分注于平皿中。

酪酸梭菌液体扩增培养基优选但不局限于：纯化水1L，胰蛋白胨10.0g，牛肉浸膏10.0g，酵母浸膏3.0g，葡萄糖5.0g，NaCl 5.0g，可溶性淀粉1.0g，半胱氨酸盐酸盐0.5g，醋酸钠3.0g，琼脂0.5g，调pH 6.6-7.0，121℃，灭菌15分钟。

为进一步具体说明本发明，发明人利用上述方法通过酪酸梭菌选择性单菌落分离固体培养基分离鉴定出了无毒性的酪酸梭菌，本发明所述酪酸梭菌并不局限于为说明本发明所述的菌，只要无毒性的酪酸梭菌均是本发明所述，均在本发明的保护范围内。

本发明所述酪酸梭菌优选但不限于酪酸梭菌DF96101保藏编号CGMCC 0313.1或丁酸梭菌QA-08保藏编号CGMCC 2303。

本发明实施说明中优选使用的酪酸梭菌的细菌学性质：