[发明专利]一种脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体、其制备方法及其催化合成克林霉素棕榈酸酯的方法

权利要求书

1.一种脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体催化合成克林霉素棕榈酸酯的方法，其特征在于：所述方法以式I所示克林霉素游离碱和式II所示棕榈酸乙烯酯为底物，在脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体的催化作用下，与DMSO在30～40℃进行反应24～30h，制得式III所示克林霉素棕榈酸酯；所述脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体为疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的磷酸钙晶体；化学反应式如下：

所述方法具体包括以下步骤：

(1)、将克林霉素游离碱、棕榈酸乙烯酯溶于DMSO中并加入脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体，置于30～40℃摇床中震荡反应24～30h；反应结束后，离心，滤渣用DMSO进行洗涤，得到上清；克林霉素游离碱与棕榈酸乙烯酯的摩尔比为1:1～1:3；

(2)、将步骤(1)得到的上清进行加热减压旋干；加入二氯甲烷溶解并用HCl调节pH值至1～2，接着加热减压旋干；加入乙醇溶解并加入乙腈，在0℃下搅拌4h，过滤，得到纯的克林霉素棕榈酸酯；

所述脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体的具体制备方法如下：

5mL的含有0.25mg/ml疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的磷酸盐缓冲液中加入浓度为200mM氯化钙溶液100μL，该混合物在4℃条件下培养24h；之后在10000rpm下离心5分钟，去除上清，得到白色沉淀；将得到的白色沉淀用去离子水洗三次，即得疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的磷酸钙酶晶体；所述磷酸盐缓冲液的浓度为20mM、pH 6.7。

2.根据权利要求1所述的一种脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体催化合成克林霉素棕榈酸酯的方法，其特征在于：所述脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体的用量是以脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体中所含脂肪酶的量计，脂肪酶的量为100mg～150mg。

3.如权利要求1所述的一种脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体催化合成克林霉素棕榈酸酯的方法，其特征在于：每1mL反应溶剂加入克林霉素游离碱0.05mmol、棕榈酸乙烯酯0.05～0.15mmol。

4.如权利要求1所述的一种脂肪酶-磷酸钙复合酶晶体催化合成克林霉素棕榈酸酯的方法，其特征在于，所述的克林霉素游离碱的制备方法如下：将2.5g的克林霉素盐酸盐溶于6mL的去离子水中，混合均匀后缓慢加入浓度为1mol/L的NaOH 6mL并不断搅拌，之后静置一段时间，去上层的水，下层的沉淀在45℃真空干燥箱中干燥一天，得到的白色固体即为克林霉素游离碱。