[发明专利]含有人巨细胞病毒UL124基因的重组质粒、基因工程菌及其应用

说明书

本发明公开了一种含有人巨细胞病毒UL124基因的重组质粒、基因工程菌及其应用。该含有人巨细胞病毒UL124基因的重组质粒通过将人巨细胞病毒UL124基因插入表达质粒pET32a中获得。然后将其通过热转进入大肠杆菌中构建能表达带有组氨酸标签的融合蛋白的原核表达工程菌，该菌株可表达相应的融合蛋白。该含有人巨细胞病毒UL124基因重组质粒的基因工程菌为人巨细胞病毒UL124多克隆抗体和单克隆抗体制备提供原材料，同时也为进一步研究UL124基因的具体功能打下了基础，从而为揭示HCMV的感染和致病机制及治疗提供方向。

技术领域

本发明涉及生物学领域，特别涉及一种含有人巨细胞病毒UL124基因的重组质粒、基因工程菌及其应用。

背景技术

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)亦称细胞包涵体病毒，由于感染的细胞肿大，并具有巨大的核内包涵体，故名，属β-疱疹病毒亚科，是已知最大的DNA疱疹病毒，是一种广泛传播的机会性病毒体，也是人类重要的致畸、致神经损伤病原体。HCMV在自然人群中感染非常普遍，在人群感染率较高，发达国家的感染率为30～70％。

HCMV的首次感染多发生于婴幼儿时期。HCMV一旦侵入人体，将长期或终身存在于体内，对于绝大多数免疫功能正常的个体来说，常表现为没有临床症状的潜伏感染；在免疫系统发育不完善的婴儿及免疫缺陷者中可发生严重感染并可致死亡。对于孕期妇女和儿童，HCMV感染的临床症状较为严重，产前合并HCMV急性感染易导致胎儿流产、早产以及畸形。

在体外研究的实验中发现：许多HCMV基因对于病毒自身的增殖是可有可无的，因此推断这些基因主要是与病毒的组织趋向性、免疫逃逸、致病性、播散、最佳化生长或潜伏感染有关。

人巨细胞病毒UL124基因在HCMV中序列是保守的，生物信息学分析表明该基因编码一个跨膜蛋白。NB实验检测到UL124的转录产物，当敲除UL124后，HCMV在HFF中生长受到严重削弱，同时UL124也是与HCMV潜伏性感染造血祖细胞有关的现知的潜伏相关的转录本之一。这些实验结果与生物信息学分析都表明UL124对HCMV的感染与增值非常重要，需要进一步的研究。因此，构建人巨细胞病毒UL124基因重组质粒的工程菌，可为制备相应的抗体打下基础，同时也为进一步研究UL124基因的具体功能打下了基础，从而为揭示HCMV的感染和致病机制及治疗提供可能。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种含有人巨细胞病毒UL124基因的重组质粒。

本发明的另一目的在于提供含有上述人巨细胞病毒UL124基因重组质粒的基因工程菌。

本发明的又一目的在于提供上述含有巨细胞病毒UL124基因重组质粒的基因工程菌的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种含有人巨细胞病毒UL124基因的重组质粒，含有UL124基因片段，其中，UL124基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。

所述的含有人巨细胞病毒UL124基因的重组质粒的构建方法，通过常规方法将UL124基因片段插入到pET32a质粒中获得。

一种含有人巨细胞病毒UL124基因重组质粒的基因工程菌，转化有上述含有人巨细胞病毒UL124基因的重组质粒。

所述的含有人巨细胞病毒UL124基因重组质粒的基因工程菌的构建方法，为将上述含有人巨细胞病毒UL124基因的重组质粒转化入原核表达工程菌中。

所述的基因工程菌优选为大肠杆菌；更优选为大肠杆菌DH5α或BL21(DE3)。

所述的含有人巨细胞病毒UL124基因重组质粒的基因工程菌在UL124重组蛋白制备中的应用。