[发明专利]植物作为宿主在表达利妥昔抗体中的应用

权利要求书

1.一种植物作为宿主表达利妥昔抗体的方法，其特征在于，将表达载体转化到农杆菌中，通过农杆菌介导真空渗透入植物组织后，提取、分离蛋白质，获得利妥昔抗体；

所述植物为生菜；

所述农杆菌介导真空渗透包括如下步骤：

步骤1：抽真空25~45s；

步骤2：保持真空（-95kPa）压力30~60s；

步骤3：释放压力使得渗透液渗入所述植物组织；

重复上述步骤2~3次，避光处理4d；

所述表达载体包括利妥昔的重链序列或轻链序列以及载体；

所述利妥昔的重链序列或轻链序列为将利妥昔重链、利妥昔轻链的密码子优化为植物偏好的密码子，获得的优化的利妥昔的重链序列或优化的利妥昔的轻链序列；

所述优化的利妥昔的重链序列如SEQ ID No.2所示；所述优化的利妥昔的重链的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述优化的利妥昔的轻链序列如SEQ ID No.4所示；所述优化的利妥昔的轻链的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述载体为双元植物载体；

其构建方法包括如下步骤：

步骤1：分别将利妥昔重链、利妥昔轻链的密码子优化为植物偏好的密码子，获得：

ⅰ.优化的利妥昔的重链序列；

ⅱ.优化的利妥昔的轻链序列；

步骤2：在所述优化的利妥昔的重链序列的5’末端分别加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端分别加入Sac I位点；

在所述优化的利妥昔的轻链序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端加入Sac I位点；

克隆到pUC57载体中，分别获得pRit-H，pRit-L克隆载体；

步骤3：通过Xbal/ Sacl分别从步骤2所得的克隆载体中获得基因片段，克隆至双元植物载体pCam35S，分别获得表达载体p35S-Rit-H，p35S-Rit-L。