[发明专利]凝结芽孢杆菌在制备预防或治疗胆管癌制剂中的应用

说明书

本发明公开了凝结芽孢杆菌在制备预防或治疗胆管癌制剂中的应用，具体是用凝结芽孢杆菌为主要活性成分制成药品等生物制剂，在预防或治疗胆管癌中的应用，属于生物医药领域。

技术领域

本发明涉及凝结芽孢杆菌在制备预防或治疗胆管癌制剂中的应用，具体是用凝结芽孢杆菌预防或治疗胆管癌，属于生物医药领域。

背景技术

胆管癌作为常见的胆道恶性肿瘤，是继肝癌之后的第二大原发性肝胆恶性肿瘤，由于其解剖位置，生长特点以及缺少确切的诊断标准使其早期诊断困难，而临床症状的不明显及有限的治疗手段，使得其预后极差。

近几年胆管癌的发病率逐年升高，手术切除是治疗胆管癌的首选方法，但由于胆管癌多病灶、伴有淋巴结转移、腹膜及远处转移，手术病人长期存活率仍不理想，大多数患者被确诊时已处于癌症晚期，所以5年生存率低于10％，并且大约80％的胆管癌由于转移或进展期只能行姑息治疗，现有治疗药物效果也不理想。

本发明人经过研究发现，凝结芽孢杆菌能够有效预防或治疗胆管癌，安全没有任何毒副作用，效果优于双歧杆菌，且未见相关研究报道，特申请此发明专利。

发明内容

本发明的目的是提供一种能预防或治疗胆管癌的制剂，该制剂由凝结芽孢杆菌制成。

本发明的制剂的制备优选是通过下述步骤实施的，但不局限于此制备工艺，公知的能实现的制备工艺均可以：采取可能含凝结芽孢杆菌的样品，然后将样品置于灭菌瓶内，研究时从中取一定量的样品加入18mL灭菌的稀释液中，充分混匀，在无菌操作台内，进行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7梯度稀释，取10^-5、10^-6、10^-7三个稀释梯度，分别涂布于凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基上，置于培养箱，37℃下培养48小时，选择长势良好的单菌落分别接种于液体扩增培养基中，置于培养箱内，37℃下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm)分离出菌体后，将菌体冷冻真空干燥，调制出干燥菌粉，然后根据《伯杰细菌鉴定手册》、相关细菌鉴定文献或16S rRNA序列对比分析进行凝结芽孢杆菌鉴定和毒性试验，将无毒性的凝结芽孢杆菌干燥菌粉按需要比例添加辅料制成片剂、胶囊、散剂、粉剂或液体制剂等各种剂型，也可加入其他活菌或低聚果糖等低聚糖起到协同作用。

凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基优选但不局限于：纯化水1000mL，蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，酵母粉5g，葡萄糖5g，磷酸二氢钾2g，吐温801.0ml，碳酸钙20g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，琼脂15g，调pH 6.2-6.5，115℃高压灭菌20min。

凝结芽孢杆菌液体扩增培养基优选但不局限于：纯化水1000mL，蛋白胨10g，牛肉浸取物3g，氯化钠5g，葡萄糖5g，调pH 7，115℃高压灭菌20min。

为进一步具体说明本发明，发明人利用上述方法通过凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基分离鉴定出了无毒性的凝结芽孢杆菌，本发明所述凝结芽孢杆菌并不局限于为说明本发明所述的菌，只要无毒性的凝结芽孢杆菌均是本发明所述，均在本发明的保护范围内。

本发明所述凝结芽孢杆菌优选但不限于凝结芽孢杆菌TBC169保藏编号CGMCC1207或凝结芽孢杆菌保藏编号CGMCC1.2407。

本发明实施说明中优选使用的凝结芽孢杆菌的细菌学性质：

1、为说明本发明，本发明利用上述方法分离的凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌TBC169保藏编号CGMCC1207。

2、菌落形态

显微镜观察：杆状，革兰氏染色阳性。