[发明专利]外周血淋巴细胞亚群细胞浓度检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及外周血淋巴细胞亚群细胞浓度检测试剂盒及其检测的方法，属于细胞检测筛查技术领域，解决细胞检测误差大、步骤繁琐的技术问题，提供多种抗体及试剂，实现临床多个样本同时检验，实验步骤简便，质量控制较好，细胞检测精度高。解决方案为：包括抗体试剂盒和配套使用的刺激液试剂盒，抗体试剂盒中存放有六孔试剂槽，六孔试剂槽编号相对应地设置有分别代表六种抗体溶液的A号至F号试剂管，抗体试剂盒中还存放有备用试剂瓶，通过外周血淋巴细胞亚群细胞浓度的检测与CD4+T细胞亚群细胞浓度检测后，将标本放置于流式细胞仪上分析流式细胞图，以MultiSET软件或者CellQuest软件获取并分析相对百分数，并计算各亚群的细胞绝对数。

技术领域

本发明属于细胞检测筛查技术领域，特别涉及外周血淋巴细胞亚群细胞浓度检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

淋巴细胞的数目和功能对维持自身免疫系统的稳态与平衡起着至关重要的作用。外周血淋巴细胞可分为T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）等，其中，各细胞根据其所表达的抗原及其功能的差异，又可分为不同亚群。

T细胞受体-白细胞分化抗原3（TCR-CD3）复合物是T细胞特有的重要标志，故称T细胞为 CD3+T淋巴细胞，它可反映机体细胞免疫功能。其增高常见于CD3+T淋巴细胞白血病、某些自身免疫性疾病（如系统性红斑狼疮）、重症肌无力、慢性活动性肝炎等；而降低可见于恶性肿瘤、白血病（如B系细胞白血病）、免疫缺陷病、应用免疫抑制剂等造成机体免疫功能处于相对较低的其他一些情况。T淋巴细胞大致可分为白细胞分化抗原4+（CD4+）和白细胞分化抗原8+（CD8+）两个大类。CD8+T减少见于γ免疫球蛋白缺乏症、胸腺发育不良、严重联合免疫缺陷病、肿瘤放射治疗等；其升高多见于病毒感染，如乙肝病毒、巨细胞病毒、EB病毒等。CD4+T淋巴细胞亚群较为复杂，它包括辅助性效应T（包括Th1，Th2和Th17）和调节性T(Treg)淋巴细胞。辅助性效应T（Th）细胞与表达MHC-I类抗原的细胞结合，分泌白介素等细胞因子，以刺激B淋巴细胞及CD8+T细胞的增值分化，又可刺激B7因子等免疫启动因子的生成，使T细胞活力提高，免疫反应增强，阻止肿瘤细胞的生长与转移。反之调节性T(Treg)淋巴细胞，可通过抑制细胞接触和产生抑制因子、抑制效应T细胞的产生和活性，从而降低机体抗肿瘤的能力。更重要的是，Treg细胞在免疫耐受中起重要作用，研究发现，许多患类风湿关节炎、红斑狼疮等自身免疫疾病的病人，外周血Treg细胞绝对计数（浓度）明显降低。白细胞分化抗原19+B淋巴细胞（CD19+B淋巴细胞）主要反映了患者的体液免疫水平。其升高可见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴瘤等；降低常见于原发性免疫缺陷病，如性联无丙种球蛋白血症、恶性肿瘤等。CD16+56+NK细胞可不依赖抗体、补体及预先致敏即可快速杀死肿瘤细胞，并与单核细胞，粒细胞等协同作用，而起到抗肿瘤抗感染的免疫调节作用。其增高可见于某些病毒感染性疾病的早期、长期使用干扰素或干扰素的诱导物、骨髓移植术后，习惯性流产、白介素-2（IL-2）治疗后；降低常见于恶性肿瘤，特别是中晚期伴有转移的患者，免疫缺陷病及使用肾上腺激素等免疫抑制剂、部分病毒、细菌和真菌感染、某些白血病及白血病前期。

我们的前期研究发现，虽然淋巴细胞各亚群细胞比例的异常可以提示很多疾病，但其绝对值计数的变化可能更能反映诸多自身免疫疾病的真正面貌，且与患者的治疗和预后息息相关。然而，因目前检测流逝细胞的方法需要进行多种标记，进行细胞标记的技术有一定难度，这些问题在破膜标记的细胞中更为突出，故绝大多数试验室仅测量目标细胞的百分比。虽然目前外周血淋巴细胞亚群浓度（绝对计数）可用多步骤流式细胞仪测试方法替代，但存在如下缺点和不足：1.过程复杂，要从多个公司购买试剂，质量控制很难；2.步骤多，操作误差大，难以比较不同实验室的结果；3.耗时多，不能实现临床多个样本同时检测；4.精度不够，且结果稳定性差；5.仅测量目标细胞的百分比，无绝对值测量。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，解决现有技术中细胞检测误差大、步骤繁琐的技术问题，提供一种外周血淋巴细胞亚群细胞浓度检测试剂盒及其检测方法。