[发明专利]牛单核细胞趋化蛋白-1杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体及应用

说明书

本发明提供了分泌抗牛单核细胞趋化蛋白1(MCP‑1)单克隆抗体的杂交瘤细胞株4G9，以及其分泌的单克隆抗体MAb 4G9。该单克隆抗体MAb 4G9具有效价高、特异性好、与天然牛MCP‑1抗原亲和力强的优势，基于此建立的Western‑Blot检测试剂盒、直接免疫荧光(DFA)检测试剂盒和流式细胞术(FCM)检测试剂盒，具有良好的灵敏度和特异性，可以用作重组牛MCP‑1的检测、对离体组织进行检测、表位鉴定研究、进出口检验检疫、流行病学研究等非诊断目的研究。

技术领域

本发明涉及一种杂交瘤细胞株，特别是涉及分泌抗牛单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)单抗的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体及应用。

背景技术

单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)是趋化因子CC亚家族的一员。MCP-1主要趋化单核细胞，使各种炎性细胞尤其是单核细胞向病变部位聚集，从而在机体防御、慢性炎症及抗肿瘤等方面起重要作用。血液中的单核细胞在特异的趋化因子作用下，发生迁移并聚集在不同病变组织中发挥重要的生物学效应，如吞噬和杀伤病原微生物，递呈抗原及分泌多种生物活性物质等。研究显示MCP-1表达水平的改变与感染性疾病、免疫功能异常、炎症性疾病与肿瘤的发展等有一定相关性。

MCP-1的免疫学检测是在特异性抗MCP-1单克隆抗体(MAb)的基础上建立的用于对样本中的MCP-1进行定性定量分析的实验方法。应用不同的单克隆抗体标记物和检测技术，可建立多种检测方法，如酶免疫分析法(Enzyme Immunoassay，EIA)，酶联免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay，简称ELISA)，流式细胞术(Flow Cytometry，简称FCM)分析法等。MCP-1的FCM具有高度敏感性和应用广泛性。作为细胞免疫状态的重要指标之一，MCP-1的FCM检测方法被广泛地用于研究基础和临床医学、疫苗免疫效果评估、器官移植、过敏反应以及多种病原微生物感染的诊断等。

但是，现有技术中制备的抗牛MCP-1(BoMCP-1)抗体，在应用于上述检测方法时往往遇到很大问题，特别是当用于检测天然牛MCP-1时效果不佳。因此，获得一种可用于牛临床检测的，效价高、特异性好、与天然牛MCP-1有抗原亲和力的牛MCP-1单抗，对牛机体免疫状态的评价及感染性疾病诊断相关的研究具有重要的意义。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种分泌牛MCP-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株以及该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在牛免疫检测领域的应用。

所述杂交瘤细胞株分泌的抗牛MCP-1的单克隆抗体效价高，其能与天然牛MCP-1的高亲和力地特异结合，其作为诊断试剂检测牛MCP-1，具有相当的灵敏度和特异性。

本发明第一方面提供了一种分泌牛MCP-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中，所述杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株4G9或其传代细胞株，所述杂交瘤细胞株4G9保藏号为CCTCCNO:C2017281。

本发明第二方面提供了一种牛MCP-1单克隆抗体4G9，其由上述杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。

本发明第三方面提供了一种牛MCP-1的Western-Blot检测试剂盒，所述Western-Blot检测试剂盒包括检测抗体、细菌脂多糖LPS刺激剂，其中，所述检测抗体为辣根过氧化物酶标记的上述牛MCP-1单克隆抗体4G9(HRP-4G9)。

本发明第四方面提供了一种牛MCP-1的直接免疫荧光DFA检测试剂盒，所述直接免疫荧光DFA检测试剂盒包括检测抗体、细菌脂多糖LPS刺激剂，其中，所述检测抗体为异硫氰酸荧光素标记的上述牛MCP-1单克隆抗体4G9(FITC-4G9)。