[发明专利]一种用加速溶剂萃取仪从鸡组织、鸡蛋及猪肉中提取哌嗪残留并衍生化的方法

说明书

本发明涉及一种用加速溶剂萃取仪从鸡组织、鸡蛋及猪肉中提取哌嗪残留并衍生化的方法。该方法是：空白样品硅藻土研磨后，装入萃取池中用ASE萃取，先后用正己烷和甲酸乙腈静态萃取；萃取液经Strata‑X‑C小柱净化后，收集样品溶液置于氮吹仪中吹干；再用乙腈复溶，超声，摇匀，移取三乙胺和丹磺酰氯溶液，用乙腈定容，避光反应，反应结束后过0.22μm有机相针式滤器，滤液供HPLC‑FLD检测。采用本发明的方法，哌嗪在鸡组织、鸡蛋及猪肉中添加浓度为LOQ的提取回收率均大于或等于72.86％，添加浓度为0.5MRL、1.0MRL、2.0MRL的提取回收率均大于或等于82.26％，满足兽药残留检测方法的需求。

技术领域

本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种用加速溶剂萃取仪从鸡组织、鸡蛋及猪肉中提取哌嗪残留并衍生化的方法。

背景技术

在对动物源性食品中的兽药进行检测时，只有将药物从样本中提取出来，才可能建立起高效的检测方法。哌嗪为白色针状晶体，弱碱性，极性较大，易溶于水、甲醇、乙腈。哌嗪无紫外、荧光基团，需要与荧光试剂反应生成具有紫外或荧光的物质，以便荧光检测器的检测。国内关于鸡组织、鸡蛋及猪肉中提取哌嗪的方法主要为液-液萃取法，提取剂一般为酸性水溶液和乙腈溶液。但目前为止，采用加速溶剂萃取技术提取鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留并用丹磺酰氯(DNS-Cl)衍生化的方法在国内尚未见报道。加速溶剂萃取技术具有溶剂用量少、萃取速度快、效率高、回收率高、重现性好和自动化程度高等优势被广泛应用在兽药残留分析领域。哌嗪是一种六元杂环胺，属于胺类化合物，能与常用的衍生试剂(如苯甲酰氯，丹磺酰氯、邻苯二甲醛)发生取代反应。但哌嗪与DNS-Cl反应条件要求严格，如三乙胺和衍生试剂的用量、温度等，不采用加速溶剂萃取技术，与哌嗪衍生化效率低、衍生产物不稳定、提取效率低、结果重现性差。因此，本发明采用加速溶剂萃取技术提取鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留并用丹磺酰氯衍生化。

发明内容

为了解决从鸡组织、鸡蛋及猪肉中提取哌嗪并衍生化的问题，本发明采用加速溶剂萃取(ASE)技术提取鸡组织、鸡蛋及猪肉中哌嗪残留，并用DNS-Cl与其发生衍生反应。

在试验中发现，在低温条件下或提取试剂为酸性水溶液时，用ASE提取样品后，提取液浑浊且有大量絮状物，不利于样品的衍生化；温度过高后时，哌嗪提取回收率不太理想。因此，对温度和提取试剂进行优化，最终选择温度为80℃，以2％甲酸乙腈为提取试剂，该方法样品基质影响小、提取效率高、回收率高。

哌嗪与DNS-Cl反应对反应条件的要求严格，三乙胺和衍生试剂的用量过少反应不完全，不利于结果的准确定量；用量过多浪费试剂。温度过低不利于反应的进行且耗时；温度过高易导致衍生试剂或衍生产物的分解。本发明在试验条件下，哌嗪与DNS-Cl反应生成的衍生产物带有强的荧光基团，且结构较稳定，能准确定性、定量并成功应用于液相色谱荧光检测法的分析。

本发明所采用的技术方案是：

一种用加速溶剂萃取仪从鸡组织、鸡蛋及猪肉中提取哌嗪残留并衍生化的方法，是：准确称取(2.0±0.02)g均质好的空白样品放于研钵中，并加入4.0g硅藻土研磨，为了达到最佳的萃取效率，尽可能将样品研磨成小颗粒，装入22mL的萃取池中，在1500psi，80℃条件下用ASE萃取，每个萃取池首先用正己烷静态萃取1次，弃掉萃取液；再用2％甲酸乙腈静态萃取2次，收集的萃取液；萃取液经Strata-X-C小柱净化，净化后的样品溶液用15mL离心管收集，置于氮吹仪中吹干；再氮吹后的样品用1.0mL乙腈复溶，超声10min，摇匀，移取100μL 0.12％三乙胺和600μL 1.0mg/mL丹磺酰氯溶液，用乙腈定容至2.0mL，置于50℃环境下避光反应20min，待反应结束后，涡旋1min，过0.22μm有机相针式滤器，滤液供HPLC-FLD检测。