[发明专利]一种表达盒、表达载体、宿主菌及制备无标签重组人IL37成熟肽的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种表达盒、表达载体、宿主菌及制备无标签重组人IL37成熟肽的方法。本发明所述一种表达盒，包含启动子、伴侣蛋白编码的核酸序列、酶切识别位点编码的核酸序列、编码人白细胞介素37成熟肽的核酸序列和终止转录子。本发明所述制备无标签重组人IL37成熟肽(rIL37)的方法是包含上述的表达盒的表达载体的宿主菌经培养后诱导重组蛋白表达，收集菌体，裂解菌体收集上清，进行亲和层析，然后加入能结合亲和层析介质的蛋白酶在线切除标签蛋白；其中所述蛋白酶可识别所述的表达盒中的酶切识别位点。本发明所述制备方法能够快速切除标签蛋白，简化了制备工艺，同时大大提高rIL37的纯度。

技术领域

本发明属于生物技术领域。具体地，本发明涉及一种表达盒、表达载体、宿主菌及制备无标签重组人IL37成熟肽的方法。

背景技术

白细胞介素即是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。由于最初是由白细胞产生又在白细胞间发挥作用，所以由此得名，现仍一直沿用。最初指由白细胞产生又在白细胞间起调节作用的细胞因子，现指一类分子结构和生物学功能已基本明确，具有重要调节作用而统一命名的细胞因子。白细胞介素和血细胞生长因子同属细胞因子，两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。目前至少发现了38个白细胞介素，分别命名为IL-1～IL-38，功能复杂，成网络，复杂重叠；在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作用，此外它们还参与机体的多种生理及病理反应。免疫系统细胞的增殖、分化和功能受到一系列细胞因子的调节。根据细胞因子的结构同源性可将其分为几个蛋白质家族，如IL-1家族、IL-6家族、IL-10家族、肿瘤坏死因子家族和造血因子家族等。

IL-37于2000年首次被发现，是IL-1家族的成员，又名IL-IF7，包括12个β链，与IL-1家族成员尤其是IL-8拥有共同的结构模型。IL-37是目前唯一没有发现鼠同系物的IL-1家族成员。且没有其鼠源同系物。IL37存在5种剪切变异体(IL37a-e)，其中含218AA的IL37b(NM014439)最长。IL37b通过加工为两种成熟肽(21-218AA和46-218AA，分子量分别为21.9kD和19.4kD)，与细胞核内的Smad3和细胞外的IL-18Rα链相互作用，抑制固有免疫系统的炎症反应，在炎症性疾病的治疗领域有着巨大的应用潜力。

众所周知，利用基因工程的方法制备重组蛋白类药物，在生物医药领域有着举足轻重的作用。有研究利用大肠杆菌表达系统重组表达带His标签的IL37b重组蛋白，但是其纯度较低。同时未切除标签的rIL37产品不能真正反映IL37本身的性质，这两个因素大大限制了rIL37产品的临床应用。而传统切除标签蛋白的方法需要将融合蛋白从层析柱上洗脱下来，然后再进行切除标签，就会导致样品中的杂质成分过多，增加了后续的纯化步骤及难度。因此，急需一种快速制备无标签、纯度高、有产业化前景的rIL37的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的旨在克服现有技术的不足，提供一种表达盒、表达载体、宿主菌及快速制备无标签、纯度高的重组人白细胞介素37成熟肽的方法。

为了达到以上目的，本发明的技术方案如下：

一种表达盒，从5’端至3’端依次包括以下元件：(1)启动子；(2)伴侣蛋白编码的核酸序列；(3)酶切识别位点编码的核酸序列；(4)编码人白细胞介素37成熟肽的核酸序列；(5)终止转录子。

作为优选，所述人白细胞介素37成熟肽的氨基酸序列如SEQ ID No：8～15中一种所示，或在SEQ ID No：8～15所示序列中截短、取代、缺失或添加一个或多个氨基酸。