[发明专利]一种艾草中拮抗菌株筛选及纯化的生产方法

权利要求书

1.一种艾草中拮抗菌株筛选及纯化的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)超声波提取制备艾草提取液：

称取25-35g的干野生艾草叶，用粉碎机将其粉碎成粉末，装于500ml烧杯中，加入290-310ml的75％乙醇溶液，于35-40℃超声波提取器中提取38-42min，待提取结束后将艾草提取液倒入锥形瓶中收集，密封于冰箱中保存，所述冰箱内温度在3-5℃，弃掉滤渣；

2)艾草内生细菌的制备：

艾草提取液稀释液的制备：用移液枪吸取1000μl艾草提取液于盛有9ml无菌水的试管中充分混合，更换移液枪头，从此试管中吸取1000μl溶液加入到另一个装有9ml无菌水的试管中，混合充分，以此类推配制10种不同稀释梯度的艾草提取液稀释液；

在无菌的操作下，将无菌的牛肉膏蛋白胨培养基倒入平板中，待牛肉膏蛋白胨培养基凝固后，用移液枪分别吸取100μl不同稀释梯度的艾草提取液稀释液于平板中进行涂布，并将平板放置于35-39℃的恒温培养箱中培养28-32h；

3)艾草内生细菌的分离、纯化：

在无菌操作下，用接种环挑取步骤2)得到的无污染的艾草内生细菌单菌落于无菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基上进行平板划线，进行初步的分离纯化；划线完毕后，将培养基倒置于35-39℃恒温培养箱中培养28-32h；

将培养好的艾草内生细菌取出，挑取无污染的艾草内生细菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面试管中进行培养；

待菌苔长出后，观察是否有杂菌长出，若有杂菌，则再次进行分离、纯化，直至获得纯培养；若没有杂菌，则将试管密封，放置于内部温度为3-5℃的冰箱贮存；

4)艾草内生细菌观察：

从斜面试管中挑取1菌环的艾草内生细菌涂布、干燥、固定、革兰氏染色，观察结果。

2.根据权利要求1所述的一种艾草中拮抗菌株筛选及纯化的生产方法，其特征在于，所述的牛肉膏蛋白胨培养基的制备：

称取8-12g蛋白胨，2-5g牛肉膏，2-6g氯化钠，18-22g营养琼脂于盛有1000ml蒸馏水的大烧杯中，加热，待溶化完全后，将溶液分装于锥形瓶中，溶液体积最好不要超过锥形瓶量程的1/2，以免高压灭菌时发生喷溅，盖好棉筛，用纸将瓶口包好，于0.103MPa、121℃高压蒸汽灭菌锅下灭菌25-35min，得到1L的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。