[发明专利]一种治疗柑橘黄龙病的多粘类芽孢杆菌培养液复合药物及其制备方法

说明书

本发明涉及一种以多粘类芽孢杆菌培养液为主要成分的柑橘黄龙病治疗药物，其组成为多粘类芽孢杆菌培养液10％、苯乳酸0.02％、MS培养基50％、水39.98％、pH为6.0。多粘类芽孢杆菌培养液配方为豆粕10克/升、微晶纤维素5克/升、硫酸镁0.1克/升、硫酸锰0.1克/升、pH＝7.0，培养条件为28℃、摇床转速220转/分钟、培养48小时。本发明采用微晶纤维素作为唯一培养碳源，诱导了β‑葡聚糖酶的生物合成，培养液中其酶活达到了261IU/mL，以该培养液为主，苯乳酸和MS为辅的药物对柑橘进行治疗，荧光定量PCR检测结果表明显著减少柑橘黄龙病病菌在病株中的含量以及黄龙病的康复。

技术领域

本发明涉及一种以多粘类芽孢杆菌培养液为主要成分的柑橘黄龙病治疗药 物，属于生物技术领域。

背景技术

柑橘黄龙病是一种柑橘类植物的毁灭性病害，目前还没有效的抑制药剂。该 病害的致病菌是一种迄今尚不能人工培养的韧皮部杆菌属细菌 (Candidatus Liberibacter)。

该病害防治的难点在于，致病菌无法获得人工培养，因为缺少该病害的目标 菌，故无法筛选出针对性的杀菌药剂。

目前对该病害的防治均使用一种或几种复配的抗生素类的杀菌药剂，此类药 剂具有广谱杀菌性，对植物和环境生态破坏严重，目前实际使用中效果不理想。

植物内生菌在高等植物中普遍存在。由于植物内生菌和植物存在着共生关 系，因此有关植物内生菌的研究正成为国内外环境、生物防治等领域的热点。虽 然柑橘黄龙病菌无法培养，但是可以找到其伴生菌，以黄龙病菌的伴生菌为筛选 抑菌药物的指示菌，此种方法可以有目的性的筛选出有效的抑菌药剂。

通过该方法筛选出的抑菌剂存在专有性，通过杀灭黄龙病菌的伴生菌改变了 植物微生态坏境，而植物微生态坏境的改变可以抑制黄龙病菌的生长、繁殖，从 而达到杀灭该病菌的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以多粘类芽孢杆菌培养液为主要成分的柑橘黄 龙病治疗药物，通过杀灭黄龙病菌的伴生菌来抑制黄龙病菌的生长、繁殖。

本发明采用的技术方案为：

一种柑橘黄龙病治疗药物，其制备方法为：首先制备多粘类芽孢杆菌培养液， 其培养基成分为豆粕10克/升、微晶纤维素5克/升、硫酸镁0.1克/升、硫酸锰 0.1克/升、pH＝7.0，接种1毫升多粘类芽孢杆菌菌种至200毫升上述培养基，培 养条件为28℃、摇床转速220转/分钟、培养48小时。培养48小时后，采用20000g 的离心力对培养液离心，取离心上清100克、加入0.2克苯乳酸、加入500毫升 MS培养基、用去离子水调配至1000mL并调节pH为6.0，混匀，即可。所述柑 橘黄龙病治疗药物采用树干输液的方法施药。

本发明以黄龙病菌的伴生菌为指示菌筛选出以富含β-葡聚糖酶的多粘类芽 孢杆菌培养液为主的药剂，苯乳酸和MS培养基为辅助成分，在无法获得人工培 养致病菌的情况下，这是柑橘黄龙病害防治的一条有效途径。

苯乳酸作为一种发酵有机酸，存在于天然蜂蜜中，是一种新型的小分子抗菌 物质，对抑制霉菌、腐败菌上有相关的研究，主要用在食物保鲜。对于果树内生 菌的抑菌研究未见报导，对本专利中涉及的细杆菌属(Microbacterium)、代尔 夫特菌属(Delftia)，不动杆菌属(Acinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、 伯克霍尔德菌属(Burkholderia)，5个菌株未见相关的抑菌研究和应用。

本发明的优点在于：

多粘类芽孢杆菌培养液中富含β-葡聚糖酶，β-葡聚糖酶参与植物的免疫反 应，可以和几丁质酶协同抑制真菌和某些细菌的生长。微生物细胞壁主要由葡聚 糖结构的高分子组成，在β-葡聚糖酶的作用下降解微生物细胞壁，造成细胞质 流失，最终抑制微生物的生长。