[发明专利]一种组合物和其制备方法

权利要求书

1.一种组合物，包括无菌注射器，其特征在于，所述无菌注射器内混合有第一溶液和第二溶液。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述第一溶液包括1×10⁷个间充质干细胞，2×10⁶个细胞裂解因子以及生理盐水；所述第二溶液包括1%的透明质酸和生理盐水，所述第一溶液和第二溶液每只均为2.5ml。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物为注射液，注射部位为关节腔。

4.如权利要求1至3中任一项所述的组合物在制备治疗骨关节炎疾病药物中的用途。

5.一种组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取样本，剪成1mm³的小块，种瓶至T75培养瓶内，每瓶加入6ml间充质干细胞培养液，混匀组织块，放入培养箱内培养，7天后换液，当细胞融合度至30%时，可进行传代；

S2、通过0.25%胰酶消化，用生理盐水洗涤2次，以5000/cm²密度传代培养，再倒置显微镜下每天观察细胞生长状况，当子代细胞融合度至80%时，可进行传代；

S3、收获3代内新鲜收获的间充质干细胞，计数后将一部分用生理盐水重悬至2×10⁶/ml，1ml，另取1×10⁷间充质干细胞离心弃上清备用；

S4、将重悬后的细胞用超声裂解仪破碎细胞，持续5min；

S5、用0.22μm滤器无菌过滤裂解后的细胞悬液，与1×10⁷间充质干细胞混匀，加入生理盐水定容至2.5ml制成第一溶液；

S6、取1g医用透明质酸粉末，加入99ml生理盐水充分混匀，用0.22μm滤器无菌过滤，分装成2.5ml/支，制成第二溶液；

S7、分别取部分最终收获的经无菌过滤后的第一溶液和第二溶液，进行生物制品无菌试验、支原体检测、内毒素检测规程，分别进行细菌、真菌、支原体、内毒素污染检测，确保均无污染。

6.根据权利要求5所述的组合物的制备方法，其特征在于，在S5中，样本来源于中胚层，并通过生物安全柜内剥离华通氏胶，且在培养瓶内，每瓶加1g离华通氏胶，培养箱为CO₂培养箱，所述间充质干细胞为原代~第十代间充质干细胞。

7.根据权利要求5所述的组合物的制备方法，其特征在于，第一溶液和第二溶液的分子量为500000~730000道尔顿。

8.根据权利要求5所述的组合物的制备方法，其特征在于，所述第一溶液包括1×10⁷个间充质干细胞，2×10⁶个细胞裂解因子以及生理盐水；所述第二溶液包括1%的透明质酸和生理盐水，所述第一溶液和第二溶液每只均为2.5ml。

9.根据权利要求5所述的组合物的制备方法，其特征在于，所述第一溶液内还含有悬浊液。

10.根据权利要求5-9任一项所述，其特征在于，其制备过程在无菌条件下进行。