[发明专利]高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法

说明书

本发明公开了一种高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，涉及溶菌酶分析检测技术领域。所述检测方法包括：(a)建立溶菌酶标准曲线：采用0.05‑0.08mol/L pH＝6.0‑6.5的磷酸盐缓冲液将溶菌酶标准品溶解并稀释成不同浓度梯度，通过紫外分光光度法在279‑283nm波长处测定吸光度值；(b)检测样品：取待测珍禽蛋蛋清样品用磷酸盐缓冲液稀释，按照与标准品相同的方式分析，测定检测样品的吸光度值，根据所述吸光度值由标准曲线计算待测珍禽蛋蛋清样品中溶菌酶含量。本发明采用低浓度磷酸盐缓冲液体系使溶菌酶的测定结果更加准确，且精密度更好，灵敏度高，回收率更高，适用于高原特种养殖珍禽蛋溶菌酶测定。

技术领域

本发明涉及溶菌酶分析检测技术领域，具体而言，涉及一种高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法。

背景技术

溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase)，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。溶菌酶主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

溶菌酶广泛存在于人体多种组织中，鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁等体液以及微生物中，其中以蛋清含量最为丰富。

GBT 25879-2010中记载了鸡蛋蛋清中溶菌酶的测定方法，具体包括：溶菌酶用0.9％氯化钠稀释成不同梯度浓度(例如0、0.2、0.4、0.8、1mg/mL)，以溶菌酶工作液浓度为横坐标，281nm波长处吸光度为纵坐标绘制标准曲线，并求出回归方程。然后将蛋清用0.9％氯化钠稀释，乙酸调溶液至pH4.5，77℃水浴10min后取出，静置1h，离心取上清，按照标准曲线绘制的操作测得OD₂₈₁值，由标准曲线回归方程计算蛋清溶液中溶菌酶的含量，再乘以稀释倍数即为蛋清中溶菌酶的含量。

前期研究表明，以高原地区特种养殖的珍禽蛋作为原料提取溶菌酶，可制得高活力的优质溶菌酶，在天然防腐剂市场可形成巨大的竞争力。

传统方法采用0.9％氯化钠作为体系的稀释溶液，盐浓度过高，容易影响溶菌酶含量测定的准确性，后期需要调节体系pH，操作繁琐，造成测定结果不准确。同时，该方法是一种普适方法，而高原地区特种养殖的珍禽蛋中溶菌酶含量较常规蛋类高很多，如果采用该方法测定容易造成结果不准确，目前还没有一种完全适用于高原特种养殖珍禽蛋中溶菌酶的检测方法。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，该方法利用分光光度法，采用磷酸盐缓冲液作为标准品和待测样品的稀释溶液，非常适合于高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测，检测精密度好、准确度高。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供了一种高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，包括以下步骤：

(a)建立溶菌酶标准曲线：采用pH＝6.0-6.5的磷酸盐缓冲液将溶菌酶标准品溶解并稀释成不同浓度梯度，通过紫外分光光度法在279-283nm波长处测定吸光度值，建立溶菌酶标准曲线；

(b)检测样品：取待测珍禽蛋蛋清样品用所述磷酸盐缓冲液稀释，按照与标准品相同的分析方式测定检测样品的吸光度值，根据所述吸光度值由标准曲线计算待测珍禽蛋蛋清样品中溶菌酶含量；

其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05-0.08mol/L。