[发明专利]高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法

权利要求书

1.一种高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)建立溶菌酶标准曲线：采用pH＝6.0-6.5的磷酸盐缓冲液将溶菌酶标准品溶解并稀释成不同浓度梯度，通过紫外分光光度法在279-283nm波长处测定吸光度值，建立溶菌酶标准曲线；

(b)检测样品：取待测珍禽蛋蛋清样品用所述磷酸盐缓冲液稀释，按照与标准品相同的分析方式测定检测样品的吸光度值，根据所述吸光度值由标准曲线计算待测珍禽蛋蛋清样品中溶菌酶含量；

其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05-0.08mol/L。

2.按照权利要求1所述的高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液的pH为6.0-6.2，和/或，磷酸盐缓冲液的浓度为0.06-0.08mol/L。

3.按照权利要求1所述的高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液的pH为6.0-6.2，和/或，磷酸盐缓冲液的浓度为1/15-1/14mol/L。

4.按照权利要求1-3任一项所述的高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，其特征在于，步骤(a)中在280-282nm波长处测定吸光度值，优选在281nm波长处测定吸光度值。

5.按照权利要求1-3任一项所述的高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液的配制包括以下步骤：

每15-25mL的1/15-1/14mol/L Na₂HPO₄溶液与75-85mL的1/15-1/14mol/L NaH₂PO₄溶液混合。

6.按照权利要求1-3任一项所述的高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，其特征在于，步骤(a)中溶菌酶标准品溶解后的浓度为300-800μg/mL，优选400-600μg/mL，进一步优选400-500μg/mL。

7.按照权利要求6所述的高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，其特征在于，溶解后将溶菌酶标准品分别稀释20倍、10倍、20/3倍、5倍、4倍和10/3倍，得到不同浓度梯度工作液，并以磷酸盐缓冲液为参比液建立溶菌酶标准曲线。

8.按照权利要求1-3任一项所述的高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，其特征在于，步骤(b)中待测珍禽蛋蛋清样品用磷酸盐缓冲液稀释100-500倍，优选稀释200-400倍，进一步优选稀释200-300倍。

9.按照权利要求1-3任一项所述的高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，其特征在于，高原特种养殖珍禽蛋包括在高原散养并饲喂纯天然植物饲料的中华黑白凤乌骨鸡蛋、贵妃鸡蛋、珍珠鸡蛋、鸭蛋、鹌鹑蛋或大雁蛋。

10.按照权利要求1-3任一项所述的高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)配制磷酸盐缓冲液：每15-25mL的1/15-1/14mol/L Na₂HPO₄溶液与75-85mL的1/15-1/14mol/L NaH₂PO₄溶液混合，得到1/15-1/14mol/L pH＝6.0-6.5的磷酸盐缓冲液；

(b)配制溶菌酶标准工作液：称取溶菌酶标准品，用所述磷酸盐缓冲液溶解成400-500μg/mL的溶菌酶标准工作液，于4-6℃密封保存备用；

(c)建立溶菌酶标准曲线：采用所述磷酸盐缓冲液将溶菌酶标准工作液分别稀释20倍、10倍、20/3倍、5倍、4倍和10/3倍，得到不同浓度梯度工作液，以磷酸盐缓冲液为参比液，通过紫外分光光度法在281nm波长处测定吸光度值，以工作液浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，求出标准曲线回归方程；

(d)检测样品：取待测珍禽蛋蛋清样品，用3-5层纱布过滤，取过滤试样，用所述磷酸盐缓冲液稀释200-300倍，得到试样溶液，按照绘制标准曲线的操作步骤，在波长281nm处测定试样溶液吸光度值，平行测定三次，取结果的算术平均值，由标准曲线回归方程计算试样溶液中溶菌酶的浓度。