[发明专利]一种具有乳酸活性的乳酸乳球菌HKS2及其分离筛选方法和应用

说明书

本发明涉及一种具有乳酸活性的乳酸乳球菌HKS2及其分离筛选方法和应用。本发明的菌株其分类命名为：(Lactococus lactis)HKS2，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO：M2017296，保藏日期为2017年5月31日。该菌株分离自海南热带养殖海水和凡纳滨对虾胃肠道的混合物。本发明的乳酸乳球菌HKS2不具溶血活性，具有较好的疏水活性、较高的自凝聚率、较强人工胃肠液耐受能力、较强胆盐耐受能力，较好的抑菌能力，将本发明的乳酸乳球菌HKS2作为饲料添加剂投喂凡纳滨对虾，经过养殖试验验证它能较好地提高机体免疫力，促进对虾生长，且效果稳定，是一种具有良好应用前景的菌株。

技术领域

本发明属于菌种领域，涉及一种乳酸乳球菌，更具体地说，本发明涉及一种具有乳酸活性的海南土著乳酸乳球菌HKS2及其分离筛选方法和应用。

背景技术

为了追求高效、快速的养殖效益，不断加大养殖密度，扩大养殖规模，导致水产动物生长速度下降，饵料系数增大，弧菌病等常见病害频发，并导致抗生素等化学渔药滥用。这不仅增加了养殖成本，而且对水产品的质量安全和人类健康构成了巨大威胁。因此，寻找一种高效、健康、安全的养殖方法已成为当前水产养殖技术的研究热点。

应用微生态制剂拌料投喂具有促进水产动物生长、提高免疫力、抑制病原菌生长、成本低、无再污染等优点，已成为无公害水产动物健康养殖模式中的主要关注焦点之一。其中，乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)是目前水产动物养殖拌料投喂中最常用的菌种之一，而乳酸乳球菌(Lactococus lactis)属于乳酸菌，是一种厌氧或兼性厌氧的革兰氏阳性菌，对人和水产动物体及环境安全，能够大量产生乳酸、乙酸和甲酸，以及胞外水解酶类而促进水产动物对营养物质的消化吸收，也维持了水产动物消化道菌群的稳定，并且对环境具有较强的适应能力强、能在水产动物肠道快速定值的细菌。

乳酸菌具有提高水产动物免疫力作用，乳酸菌通过在水产动物肠道内定植，产生乳酸、各种酶、细菌素的小分子物质微生态、过氧化氢以及降解氨基酸产生吡啶多胺衍生物，这些物质能够刺激水产动物作出免疫应答，使水产动物处于免疫活跃的状态，从而提高水产动物的免疫能力。

乳酸菌对肠道菌群调节作用，水产动物的健康状况与肠道内的微生物具有密切关系，肠道中的微生物是水产动物内生态环境的重要组成部分，影响动物的许多机能。乳酸菌通过黏附素(S-层蛋白、脂磷壁酸、脂多糖、肽聚糖等)黏附在动物胃肠道的上皮细胞中，并定植在宿主的肠道中，在肠道黏膜表面形成一道“生物膜”的屏障。“生物膜”屏障有效的阻挡了其他有害菌在肠道表面的定植，从而使动物的肠道有害菌减少，菌群生态更稳定。乳酸菌黏附或者定植胃肠道道中，在肠道中占位，对其他有害细菌在胃肠道中生存形成细菌干扰。

乳酸菌产生的有机酸，主要为乳酸、乙酸、丙酸等。能有效降低胃肠道的pH值，从而抑制了其他耐酸性不强的有害细菌在胃肠道中的存活。乳酸菌在胃肠道中产生的过氧化氢具有一定的杀菌作用。

乳酸菌能够合成维生素(叶酸、维生素B12等)、各种消化酶(蛋白酶等)、γ-氨基酸、胞外多糖(夹膜多糖等)、共轭亚油酸，这些乳酸菌分泌物或合成产物能提供动物一定的营养物质，有助于动物对营养物质的消化吸收，促进动物的健康生长！相关研究研究表明乳酸菌在水产应用方面取得显著效果，Kongnum等研究表明，采用乳杆菌拌料投喂凡纳滨对虾6周后，对虾的免疫力增强，饲料转化率、增重率、成活率和对弧菌的抵抗力均得到提高。Dawood等研究表明，在饲料中添加乳杆菌和乳酸乳球菌投喂红鲷鱼56天，免疫指标和生长指标显著提升，饵料系数降低。苟小兰等研究发现，乳酸菌对嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)等致病菌均有明显的抑制作用。