[发明专利]人羊膜上皮细胞的无血清培养基

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及人羊膜上皮细胞的无血清培养基。本发明公开了一种人羊膜上皮细胞的无血清培养基，其包含细胞基础培养基和培养因子，以细胞基础培养基体积为基准，所述培养因子及其含量分别为UltraGROTM‑Advanced，体积比2％‑10％；Supplement S7，体积比1％‑5％；L‑谷氨酰胺，1‑5mM。本发明人羊膜上皮细胞的无血清培养基不引入外源性基因，不改变细胞的基因组稳定性，无动物源成分，无致瘤风险，且不涉及饲养层细胞等外源性细胞混杂而导致的干细胞移植安全问题，能有效地体外扩增其细胞数量；同时保持其质量和羊膜上皮细胞的干细胞性和上皮特性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及人羊膜上皮细胞的无血清培养基。

背景技术

人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells，hAEC)是从医疗废弃物产妇胎盘的羊膜上皮层分离来的上皮细胞，具有多向分化能力、低免疫原性、免疫调节、分泌生长因子和抗炎症功能的成体干细胞。羊膜在胚胎发育的早期阶段发挥重要的功能。它抑制对胎儿的免疫应答，而且产生各种营养因子支持胚胎的发育。除此之外，人羊膜上皮细胞为因疾病造成的组织细胞损伤的患者提供了组织修复的替代细胞的来源。目前，在基础研究领域人羊膜上皮细胞倍受关注，在烧伤、糖尿病足、干眼病、脊髓损伤、中风和阿尔茨海默尔病等神经退行性疾病中起着修复损伤组织的作用，目前，在国际干细胞治疗领域也开展了部分的临床研究，主要是烧伤和中风、脊髓损伤等神经系统疾病。将来，人羊膜上皮细胞可能在烧伤、神经系统疾病等方面有着重要的应用。临床研究发现移植的干细胞的数量与移植后损伤组织的修复和免疫功能的重建有密切关系，并且较大剂量的干细胞的输注利于供者干细胞在受体内的植入。所以将来hAEC用于干细胞治疗时，也面临着一个严峻的问题：没有足够多的质量好的hAEC用于移植。

hAEC进行体外扩增培养是一个很好的解决方法，同时也是一项极具挑战的技术，基于以下几种原因：①hAEC的体外扩增要求保持持续的自我更新能力的同时，也要在扩增中阻止其分化；②hAEC的体外扩增中容易发生向间质样细胞转化的特点，需要保持上皮样细胞的特性；③扩增干细胞的数量与移植的成功率密切相关。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种人羊膜上皮细胞的无血清培养基。

本发明公开了一种人羊膜上皮细胞的无血清培养基，其包含细胞基础培养基和培养因子，以细胞基础培养基体积为基准，所述培养因子及其含量分别为UltraGRO^TM-Advanced，体积比2％-10％；Supplement S7，体积比1％-5％；L-谷氨酰胺，1-5mM。

在一些优选实施例中，所述细胞基础培养基具体为EpiLife basal medium(Epilife基础培养基)

在一些优选实施例中，所述无血清培养基的pH为6.8-7.2。

在一些优选实施例中，所述无血清培养基还含有重组人表皮生长因子，其浓度为20-200mg/L。

在一些优选实施例中，所述UltraGRO^TM-Advanced在所述无血清培养基中的体积比5％；

在一些优选实施例中，所述Supplement S7在所述无血清培养基中的体积比为1％；

在一些优选实施例中，所述重组人表皮生长因子的浓度为20mg/L；

在一些优选实施例中，所述L-谷氨酰胺的浓度为2Mm。

本发明提供了上述无血清培养基在细胞体外扩增培养中的用途。

本发明的另外一个目的是提供一种细胞的培养方法。