[发明专利]一种检测三聚氰胺的电化学生物传感器及制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测三聚氰胺的电化学生物传感器，其特征在于，包括：Aptamer，Primer，HAP1，血红素，钾离子，过氧化氢，λ-核酸外切酶和修饰HAP2的金电极；

所述Aptamer的序列如SEQ No.1所示；

Primer的序列如SEQ No.2所示；

HAP1的序列如SEQ No.3所示，其5’端修饰磷酸根；

HAP2的序列如SEQ No.4所示，其5’端修饰磷酸根，3’端修饰巯基。

2.根据权利要求1所述的电化学生物传感器，其特征在于，所述修饰HAP2的金电极采用以下方法制备获得：

a）金电极抛光处理；

b）将HAP2溶液滴在上述处理后的金电极表面，保温孵育。

3.根据权利要求2所述的电化学生物传感器，其特征在于，所述抛光处理为将金电极依次在0.3 µm和0.05 µm的氧化铝浆中进行抛光至镜面，ddH₂O反复冲洗。

4.根据权利要求2所述的电化学生物传感器，其特征在于，所述HAP2浓度为1-20 μM。

5.根据权利要求3所述的电化学生物传感器，其特征在于，所述孵育温度为37 ℃，孵育时间为2 h。

6.根据权利要求1所述的电化学生物传感器，其特征在于，所述HAP1的终浓度为1-20µM。

7.一种利用如权利要求1所述的电化学生物传感器检测三聚氰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将Aptamer与Primer在缓冲液中杂交成探针（Probe）；

（2）将探针、HAP1、10×的λ-核酸外切酶缓冲液、λ-核酸外切酶和待测液或系列浓度的三聚氰胺标准溶液混合后恒温孵育；

（3）将步骤（2）中的混合溶液与λ-核酸外切酶一同滴加到修饰HAP2的金电极上，然后恒温孵育；

（4）将血红素溶液滴加到步骤（3）所得的溶液中，然后恒温孵育；

（5）以缓冲溶液漂洗步骤（4）中的电极；

（6）在含H₂O₂的缓冲溶液中，以Ag/AgCl为参比电极，以Pt电极为对电极，采用差分脉冲伏安法测量电信号变化；

（7）根据三聚氰胺标准溶液的电信号作标准曲线，计算回归方程，根据回归方程与待测液电信号计算待测液中三聚氰胺的浓度。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述杂交过程为Aptamer与Primer在缓冲液中95℃下孵育5min，缓慢冷却至室温。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤（6）中优选的参数为：电位0到-0.6 V，脉冲宽度0.05 V，扫描速率0.06 s。