[发明专利]一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法

说明书

本发明设涉及一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法，通过两步溶胀对种子微球进行溶胀处理，得到表面羧基化的聚苯乙烯微球，微球表面的羧基与藻红蛋白偶联，得到藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针。由此方法制得的聚苯乙烯微球荧光探针稳定性强，灵敏度高，不易淬灭，且安全系数高，无毒副作用。

技术领域

本发明涉及一种荧光标记的聚苯乙烯探针的制备方法，具体涉及一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球荧光探针的制备方法。

背景技术

随着材料学的不断发展，各学科之间的交叉研究。越来越多信息化、数字化的信息材料不断被研究和应用。最近，无机发光量子点、荧光聚合物纳米微球、复合荧光二氧化硅纳米粒子等荧光纳米探针的相继出现，结合有效的物理检测手段，赋予足够的信息，为生物分析提供了新的发展领域，成为了近年来研究的热点。

聚苯乙烯也是目前研究和应用极为广泛的一种荧光聚合物微球，由于其具有良好的机械性能和稳定性。目前用于标记聚苯乙烯微球的荧光物质有很多种，包括荧光染料、量子点、金属配合物等。但这些主要是通过物理吸附的方式负载于聚苯乙烯微球，存在稳定性差或者易猝灭的问题。

藻红蛋白用于荧光分析，具有传统化学荧光染料无法比拟的优越性：1、在较宽的pH范围内具有较宽的吸收光谱，比较容易选择合适的激发波长，从而得到高效荧光发射，且激发时有特异的荧光发射峰；2、吸光度和荧光量子产率很高，荧光强而稳定，灵敏度高；3、具有较小的荧光背景，不易淬灭，荧光保存期较长；4、水溶性极佳，易与其他分子交联结合，非特异性吸附少；5、纯天然海洋生物提取，无任何毒副作用，不含放射性，操作使用非常安全。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法，包括以下步骤：

S1：通过两步种子溶胀聚合制备表面羧基化聚苯乙烯微球；

S2：将S1中的表面羧基化聚苯乙烯微球与藻红蛋白偶联，获得藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针。

本发明的通过两步种子溶胀聚合制备了表面羧基化功能的聚苯乙烯微球，利用氨基和羧基耦合反应，在羧基化微球表面定量偶联藻红蛋白得到荧光探针聚苯乙烯微球。

本发明的有益效果是得到的藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针稳定性强，灵敏度高，不易淬灭，且安全系数高，无毒副作用。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

进一步，本发明中，步骤S1中表面羧基化聚苯乙烯微球具体制备步骤如下：

S11：将种子微球按照1-1.5:200的质量比加入乳化剂水溶液中，超声处理，获得悬浮液1，将溶胀剂按照1-1.5:200的质量比加入乳化剂水溶液中，超声处理，获得悬浮液2，将悬浮液1和悬浮液2按照质量比为1:1-1.5进行混合，室温溶胀4-8小时，获得悬浮状的第一溶胀物；

S12：向所述第一溶胀物中依次加入引发剂、聚合单体、功能单体、交联剂、乳化剂和水，所述引发剂、聚合单体、功能单体、交联剂及乳化剂和水与第一溶胀物的质量比分别为0.0025-0.0125:1、0.25-1.25:1、0.005-0.025:1、0.5-1:1、0.005-0.01:1和2：1，搅拌6-12小时后，转移至80-120℃油浴锅，再依次加入稳定剂、染色剂和超纯水，所述稳定剂、染色剂和超纯水与第一溶胀物质量比分别为0.05-0.25：1、0.0075％-0.075％：1和1.25:1，最后使用10％-15％的乙醇洗涤并重力筛选后得到尺寸均一的羧基化微球。

进一步，所述步骤S11和S12中的乳化剂为十二烷基硫酸钠，所述乳化剂水溶液的质量浓度为0.25％，所述溶胀剂为环己烷。