[发明专利]一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法

权利要求书

1.一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：通过两步种子溶胀聚合制备表面羧基化聚苯乙烯微球；

S2：将S1中的表面羧基化聚苯乙烯微球与藻红蛋白偶联，获得藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针。

2.根据权利要求1所述的一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法，其特征在于，所述步骤S1中表面羧基化聚苯乙烯微球的制备步骤如下：

S11：将种子微球按照1-1.5:200的质量比加入乳化剂水溶液中，超声处理，获得悬浮液一，将溶胀剂按照1-1.5:200的质量比加入乳化剂水溶液中，超声处理，获得悬浮液二，将悬浮液一和悬浮液二按照质量比为1:1-1.5进行混合，室温溶胀4-8小时，获得悬浮状的第一溶胀物；

S12：向所述第一溶胀物中依次加入引发剂、聚合单体、功能单体、交联剂、乳化剂和水，所述引发剂、聚合单体、功能单体、交联剂、乳化剂和水与第一溶胀物的质量比分别为0.0025-0.0125:1、0.25-1.25:1、0.005-0.025:1、0.5-1:1、0.005-0.01:1和2：1，搅拌6-12小时后，转移至80-120℃油浴锅，再依次加入稳定剂、染色剂和超纯水，所述稳定剂、染色剂和超纯水与第一溶胀物质量比分别为0.05-0.25：1、0.0075％-0.075％：1和1.25:1，最后使用10-15vol％的乙醇洗涤并重力筛选后得到尺寸均一的羧基化微球。

3.根据权利要求2所述的一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法，其特征在于，所述步骤S11和S12中的乳化剂为十二烷基硫酸钠，所述乳化剂水溶液的质量浓度为0.25％，所述溶胀剂为环己烷。

4.根据权利要求2所述的一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法，其特征在于,所述步骤S12中的引发剂为过氧化二苯甲酰，聚合单体为苯乙烯，功能单体为丙烯酸，交联剂为二乙烯苯和甲苯中的任一种或两者的混合。

5.根据权利要求2所述的一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法，其特征在于，所述步骤S12中稳定剂为聚乙烯吡咯烷酮，染色剂为次甲基蓝。

6.根据权利要求1所述的一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法，其特征在于，步骤S2中表面羧基化聚苯乙烯微球与藻红蛋白偶联的具体制备步骤如下：

S21：取S12中的羧基化微球按照1:50-500的质量比分散于缓冲溶液中，加入偶联剂，所述偶联剂与缓冲液的质量比为1-2:300，搅拌15-20分钟；

S22：在上述溶液中加入藻红蛋白，所述藻红蛋白与缓冲液的质量比为1:50-500，30℃-50℃旋转振荡反应2-4小时，最后用缓冲液洗涤。

7.根据权利要求1所述的一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法，其特征在于，所述偶联剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺1:1形成的混合物。

8.根据权利要求1所述的一种藻红蛋白标记聚苯乙烯微球的荧光探针制备方法，其特征在于所述缓冲液为0.01mol/L的PBS缓冲液。