[发明专利]以CD33为靶点的特异性抗体、CAR-NK细胞及其制备和应用

说明书

本发明提供一种抗CD33抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区包含重链VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3；所述轻链可变区包含轻链VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3。本发明提供以CD33为靶点的抗体或其抗原结合片段，并以此所构建的CD33 CAR‑NK细胞为单克隆细胞株培养并扩增所得，其性状稳定，可用于大规模生产制备。CD33 CAR‑NK细胞以CD33分子为靶抗原，能够特异性地杀死或杀伤髓系白血病细胞，可作为髓系白血病类疾病的治疗药物，用于CD33分子高表达的髓系白血病的治疗。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及以CD33为靶点的特异性抗体，以CD33为靶点的CAR-NK细胞及其制备和应用。

背景技术

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，缩写CAR)修饰的免疫细胞使用遗传工程手段修饰免疫细胞使其表达外源性抗肿瘤基因。CAR基因主要包括细胞外识别域和细胞内信号转导结构域：前者用于识别肿瘤表面特异性分子和后者用于启动识别肿瘤表面分子后的免疫细胞应答，发挥细胞毒作用，其主要以T-细胞为载体。

CAR-T，全称是Chimeric AntigenReceptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)是将能识别某种肿瘤抗原的抗体的抗原结合部与CD3-ζ链或4-1BB等胞内元件在体外偶联为一个嵌合基因，通过基因转导的方法转染患者的T细胞，使其表达嵌合抗原受体(CAR)。患者的T细胞被“重编码”后，生成大量肿瘤特异性的CAR-T细胞。CD33是髓系细胞分化抗原，分子量为67KD，主要分布在髓系血细胞，特别是在分化的早期阶段。其胞内区含有免疫酪氨酸抑制基序(ITIM)，所以它可能具有通过募集信号分子来调节细胞的生长与分化等功能。CD33在90％以上的急性髓系白血病患者都有表达。在造血干细胞表面没有表达,在成熟的粒细胞和其他组织也没有表达,因此CD33成为髓系白血病治疗的良好靶点。

目前经过大量的研究证明CD33可作为治疗髓系白血病的靶点用于CAR的构建。然而制备CAR-T的T细胞只能来自患者自身，不能异体回输，导致其不仅生产成本高，而且不能大批量生产和制备，使其应用受到了极大的限制。

自然杀伤(natural killer，缩写NK)细胞是非特异性免疫系统的重要组成部分，先天免疫系统反应的关键性介质细胞。NK细胞是一种广谱免疫细胞，具有快速发现和摧毁异常细胞(如癌症或病毒感染的细胞)的特异功能，而且不需要提前致敏或HLA配型，即可展示强大的溶解异常细胞的活性。使用免疫细胞(包括NK细胞)来治疗癌症是近年来新趋势，这种新疗法有望为对传统手术、化疗和放疗无效的肿瘤提供了新的治愈希望。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种以CD33为靶点的抗CD33抗体或其抗原结合片段，以及能够表达该抗体或抗原结合片段的CAR-NK细胞及其制备和应用，该细胞性状稳定，可大批量生产和制备，可进行异体回输。

本发明一方面提供一种以CD33为靶点的抗CD33抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区包含重链VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3；所述轻链可变区包含轻链VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3，其中所述VHCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的序列或其同源序列；所述VHCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的序列或其同源序列；所述VHCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的序列或其同源序列；所述VLCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的序列或其同源序列；所述VLCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示的序列或其同源序列；所述VLCDR3的氨基酸序列如SEQ IDNO：6所示的序列或其同源序列。

示例性地，所述VH链的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的序列或其同源序列。