[发明专利]以CD33为靶点的特异性抗体、CAR-NK细胞及其制备和应用

权利要求书

1.抗CD33抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变区（VH）和轻链可变区（VL），其中所述重链可变区包含重链VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3；所述轻链可变区包含轻链VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3，其中所述VHCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的序列；所述VHCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的序列；所述VHCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的序列；所述VLCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的序列；所述VLCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示的序列；所述VLCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示的序列。

2.如权利要求1所述的抗CD33抗体或其抗原结合片段，所述VH链的氨基酸序列如SEQID NO：7所示的序列；所述VL链的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示的序列。

3.如权利要求1或2所述的抗CD33抗体或其抗原结合片段，所述VH链和VL链直接连接或通过连接肽连接。

4.如权利要求1或2所述的抗CD33抗体或其抗原结合片段，所述抗CD33抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示的序列。

5.如权利要求1或2所述的抗CD33抗体或其抗原结合片段，所述抗CD33抗体或其抗原结合片段与CD33的亲和力达到1.697×10^-7M以上。

6.表达权利要求1-5中任一项所述的抗CD33抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。

7.如权利要求6所述的核苷酸序列,其中所述的核苷酸序列包含SEQ ID NO：10所示的序列或其简并序列，和/或SEQ ID NO：11所示的序列或其简并序列。

8.如权利要求7所述的核苷酸序列,所述核苷酸序列如SEQ ID NO：12所示的序列或其简并序列。

9.如权利要求7所述的核苷酸序列，所述简并序列与原序列的同源性为60%以上。

10.如权利要求7所述的核苷酸序列，所述简并序列与原序列的同源性为90%以上。

11.权利要求1-5中任一项所述的抗CD33抗体或其抗原结合片段或权利要求6-10中任一项所述的核苷酸所表达的抗CD33抗体或其抗原结合片段的制备方法，其包括：在宿主细胞中表达权利要求6-10中任一项所述的核苷酸。

12.Anti CD33 CAR-NK细胞，其能够表达嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含权利要求1-5中任一项所述的抗CD33抗体或其抗原结合片段，或权利要求6-10中任一项所表达的抗CD33抗体或其抗原结合片段，或权利要求11所制备的抗CD33抗体或其抗原结合片段。

13.如权利要求12所述的Anti CD33 CAR-NK细胞，所述嵌合抗原受体还包含跨膜结构域和共刺激信号传导区。

14.如权利要求13所述的Anti CD33 CAR-NK细胞，所述的跨膜结构域选自：CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD134、CD137、ICOS和CD154中的一种或多种的跨膜结构域；

所述的共刺激信号传导区包含共刺激分子的细胞内结构域，所述的共刺激分子选自：CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、CD2、CD4、CD28、CD134、CD137、ICOS、CD154、4-1BB和OX40中的一种或多种。