[发明专利]以CD19为靶点的特异性抗体、CAR-NK细胞及其制备和应用

说明书

本发明提供一种以CD19为靶点的抗CD19抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区包含重链VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3；所述轻链可变区包含轻链VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3。本发明提供以CD19为靶点的抗CD19抗体或其抗原结合片段，并以此所构建的Anti CD19 CAR‑NK细胞为单克隆细胞株培养并扩增所得，其性状稳定，可用于大规模生产制备。Anti CD19 CAR‑NK细胞以CD19分子为靶抗原，能够特异性地杀死或杀伤淋巴瘤细胞，可作为淋巴瘤类疾病的治疗药物，用于CD19分子高表达的肿瘤的治疗。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及以CD19为靶点的特异性抗体，以CD19为靶点的CAR-NK细胞及其制备和应用。

背景技术

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，缩写CAR)修饰的免疫细胞使用遗传工程手段修饰免疫细胞使其表达外源性抗肿瘤基因。CAR基因主要包括细胞外识别域和细胞内信号转导结构域：前者用于识别肿瘤表面特异性分子和后者用于启动识别肿瘤表面分子后的免疫细胞应答，发挥细胞毒作用，其主要以T-细胞为载体。

CAR-T，全称是Chimeric AntigenReceptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)是将能识别某种肿瘤抗原的抗体的抗原结合部与CD3-ζ链或4-1BB等胞内元件在体外偶联为一个嵌合基因，通过基因转导的方法转染患者的T细胞，使其表达嵌合抗原受体(CAR)。患者的T细胞被“重编码”后，生成大量肿瘤特异性的CAR-T细胞。CD19是95kD的穿膜糖蛋白，它属于免疫球蛋白超家族并且在B细胞调节应答中起核心作用。大量的研究证明CD19可作为治疗B细胞淋巴瘤的靶点用于CAR-T的构建。

目前经过大量的临床实践证明，以该CD19为靶点开发的CAR-T药物取得了显著的疗效。诺华制药公司2017年3月29日宣布其CAR-T产品CTL019进入FDA加速审批通道。2015年12月，FDA授予了Kite Pharma的CAR-T疗法KTE-C19的突破性疗法认证(BTD)，用于治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的适应症疗法。2017年4月1日，Kite Pharma也宣布正式向FDA完成提交CAR-T疗法KTE-C19(后改名为“axicabtagene ciloleucel”)的生物制品许可申请(BLA)滚动申报。

但目前CD19 CAR-T研究仍然存在一些问题。例如：第一，制备CAR-T的T细胞只能来自患者自身，不能异体回输；第二，国际上用于CAR-T制备的CD19抗体的ScFV序列大多为鼠源抗体，存在较大的免疫排斥反应风险。

自然杀伤(natural killer，缩写NK)细胞是非特异性免疫系统的重要组成部分，先天免疫系统反应的关键性介质细胞。NK细胞是一种广谱免疫细胞，具有快速发现和摧毁异常细胞(如癌症或病毒感染的细胞)的特异功能，而且不需要提前致敏或HLA配型，即可展示强大的溶解异常细胞的活性。使用免疫细胞(包括NK细胞)来治疗癌症是近年来新趋势，这种新疗法有望为对传统手术、化疗和放疗无效的肿瘤提供了新的治愈希望。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种以CD19为靶点的抗CD19抗体或其抗原结合片段，以及能够表达该结构域的CAR-NK细胞及其制备和应用，该细胞一方面性状稳定，可大批量生产和制备，可进行异体回溯；另一方面，用于构建其的抗体序列为人源抗体序列，其作为药物应用时，极大地降低了免疫排斥反应的风险。