[发明专利]以CD19为靶点的特异性抗体、CAR-NK细胞及其制备和应用

权利要求书

1.抗CD19抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述重链可变区包含重链VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3；所述轻链可变区包含轻链VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3，其中所述VHCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的序列；所述VHCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的序列；所述VHCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的序列；所述VLCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的序列；所述VLCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示的序列；所述VLCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示的序列。

2.如权利要求1所述的抗CD19抗体或其抗原结合片段，所述VH链的氨基酸序列如SEQID NO：7所示的序列；所述VL链的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示的序列。

3.如权利要求1或2所述的抗CD19抗体或其抗原结合片段，所述VH链和VL链直接连接或通过连接肽连接。

4.如权利要求1或2所述的抗CD19抗体或其抗原结合片段，所述抗CD19抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示的序列。

5.如权利要求1或2所述的抗CD19抗体或其抗原结合片段，所述抗CD19抗体或其抗原结合片段与CD19的亲和力达到8.473×10^-8M以上。

6.编码权利要求1-5中任一项所述的抗CD19抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。

7.如权利要求6所述的多核苷酸,其中所述的多核苷酸的序列包含SEQ ID NO：10所示的序列或其简并序列，和SEQ ID NO：11所示的序列或其简并序列。

8.如权利要求6所述的多核苷酸，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO：12所示的序列或其简并序列。

9.如权利要求7所述的多核苷酸，所述简并序列与原序列的同一性为60％以上。

10.如权利要求9所述的多核苷酸，所述简并序列与原序列的同一性为90％以上。

11.权利要求1-5中任一项所述的抗CD19抗体或其抗原结合片段或权利要求6-10中任一项所述的多核苷酸所编码的抗CD19抗体或其抗原结合片段的制备方法，其包括：在宿主细胞中表达权利要求6-10中任一项所述的多核苷酸。

12.Anti CD19 CAR-NK细胞，其能够表达嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括权利要求1-5中任一项所述的抗CD19抗体或其抗原结合片段，和/或权利要求6-10中任一项所述的多核苷酸所编码的抗CD19抗体或其抗原结合片段，和/或权利要求11所制备的抗CD19抗体或其抗原结合片段。

13.如权利要求12所述的Anti CD19 CAR-NK细胞，所述嵌合抗原受体还包含跨膜结构域和共刺激信号传导区；所述的跨膜结构域选自：CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD134、CD137、ICOS和CD154中的一种或多种的跨膜结构域；

所述的共刺激信号传导区包含共刺激分子的细胞内结构域，所述的共刺激分子选自：CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、CD2、CD4、CD28、CD134、CD137、ICOS、CD154、4-1BB和OX40中的一种或多种。

14.如权利要求13所述的Anti CD19 CAR-NK细胞，所述的跨膜结构域为CD8跨膜结构域；

所述的共刺激信号传导区包含4-1BB和CD3ζ胞内结构域。