[发明专利]登革热病毒疫苗

说明书

本发明提供了一种登革热病毒疫苗，本发明从目前报道较少的登革热病毒T细胞免疫方面着手，应用猿猴腺病毒载体构建疫苗以克服人型腺病毒载体实际运用中的局限性，成功构建了Ⅱ型登革热病毒Ad载体疫苗C9‑NS1，该载体快速平端克隆技术克隆PCR产物，避免了质粒和目的片段的双酶切操作，比较方便快捷。该载体表达山融合蛋白的C端有组氨酸标签方便重组蛋白的亲和层析纯化，组氨酸标签蛋白比较小，对表达蛋白的活性和功能几乎不产生影响。本发明从多个方面综合评价了登革热病毒NS 1蛋白来源的疫苗的免疫功能，为进一步研发高效光谱登革热基因疫苗奠定基础。

技术领域

本发明涉及一种疫苗，具体涉及一种登革热病毒疫苗。

背景技术

登革热病毒(Dengue virus)是小型黄病毒，属于黄热病毒属，是一种蚊媒急性传染病的病原体，导致登革热，登革热热和登革热休克综合增等疾病。通常由在白天叮咬人的埃及伊蚊和白纹伊蚊传播。登革热病毒能够引起一系列临床症状，包括有生命危险的失血性休克综合征和较少见的伴有肝衰与脑病的急性肝炎。感染登革热病毒轻则突然发热、剧烈肌肉疼痛、骨关节痛，重则广泛出血、迅速休克。

登革热病毒为有包膜的单股、正链RNA病毒，包括4个不同的血清型，登革热病毒基因组长10-11kb，编码3种结构蛋白(C、PrM、E)和7种非结构蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b、NS5)。目前基于NS1蛋白的免疫机制尚不明确，大多认为体液免疫占主要作用。NS1作为一种保护蛋白，被认为有希望作为研究登革热基因疫苗的抗原。理想的登革疫苗应该是一次免疫能同时预防4个血清型的病毒感染，且4个血清型之间的免疫应答均衡，不存在加重疾病的潜在风险。另外，理想的登革病毒减毒活疫苗在受试者体内不能产生太高的病毒滴度，但又可在体内复制，刺激机体产生足够的免疫应答。

发明内容

基于此，本发明提供了一种登革热病毒疫苗。

本发明采取的技术方案如下：

1.一种登革热病毒疫苗，所述疫苗为基因重组疫苗，以E1基因序列缺失的腺病毒载体H5为载体构建，并含有登革热病毒NS1蛋白基因。

优选的，还包括免疫佐剂。

优选的，所述免疫佐剂为弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂。

优选的，所述登革热病毒NS1蛋白基因为登革热2型病毒海南株的NS1蛋白基因序列，序列如SEQ NO.1所示。

2.腺病毒载体-NS1重组蛋白，以E1基因序列缺失的腺病毒载体H5为载体，导入登革热病毒NS1蛋白基因后表达获得。

3.一种多克隆抗体，由上述重组蛋白作为抗原，经免疫反应制备获得。

4.一组免疫原性多肽，由登革热病毒2型海南株的NS1蛋白基因序列合成的含10个氨基酸重复序列的多肽，重复多肽序列为AGPWHLGKL。

以腺病毒为载体构建的登革热疫苗能诱导针对4个血清型登革热病毒的较高滴度中和抗体，且4个血清型抗体水平均衡。

本发明的有益效果在于：本发明从目前报道较少的登革热病毒T细胞免疫方面着手，应用猿猴腺病毒载体构建疫苗以克服人型腺病毒载体实际运用中的局限性，包括所使用免疫活性及异种移植引起的一系列无关反应等，成功构建了Ⅱ型登革热病毒Ad载体疫苗C9-NS1。该载体快速平端克隆技术克隆PCR产物，避免了质粒和目的片段的双酶切操作，比较方便快捷。该载体表达山融合蛋白的C端有组氨酸标签方便重组蛋白的亲和层析纯化，组氨酸标签蛋白比较小，对表达蛋白的活性和功能几乎不产生影响。并从多个方面综合评价了登革热病毒NS 1蛋白来源的疫苗的免疫功能，为进一步研发高效光谱登革热基因疫苗奠定基础。由于登革病毒感染广泛，并且主要在发展中国家传播，日益严重的趋势给人类健康构成了极大威胁。从临床前及临床研究结果来看，基因重组减毒活疫苗的前景比较被看好并可望在近几年内获准上市。