[发明专利]改善单克隆抗体的检测结果的方法

权利要求书

1.一种样品中的单克隆抗体的检测方法，其包括以下的步骤：

(a)捕捉样品中的单克隆抗体并固定化于多孔体的细孔内的步骤、

(b)使固定化有该单克隆抗体的多孔体与固定化有蛋白酶的纳米颗粒接触而进行单克隆抗体的选择性蛋白酶解的步骤、和

(c)通过液相色谱质谱分析即LC-MS来检测利用选择性蛋白酶解而得到的肽片段的步骤，

在步骤(a)之后，还包括以下的步骤：

(a’)追加还原剂而进行在酸性条件下的还原反应的步骤、和

(a”)在进行还原反应之后且进行选择性蛋白酶解之前去除还原剂的步骤，

其中，在pH2.5以下的强酸性条件下实施步骤(a’)；

所述蛋白酶为胰蛋白酶，所述单克隆抗体选自由利妥昔单抗、本妥昔单抗、纳武单抗、曲妥珠单抗、英夫利昔单抗、美泊利单抗、莫加木珠单抗和托珠单抗组成的组中的任一种。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，通过在有机磷系还原剂的存在下的孵育来实施步骤(a’)。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，有机磷系还原剂为三(2-羧乙基)膦即TCEP(Tris(2-carboxyethyl)phosphine)或其盐酸盐。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，TCEP的浓度为100～500mM。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，步骤(a’)的还原反应的时间为10～60分钟。

6.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，通过LC-MS检测的肽片段源自重链。

7.一种样品中的单克隆抗体的检测方法，其包括以下的步骤：

(a)捕捉样品中的单克隆抗体并固定化于多孔体的细孔内的步骤、

(b)使固定化有该单克隆抗体的多孔体与固定化有蛋白酶的纳米颗粒接触而进行单克隆抗体的选择性蛋白酶解的步骤、和

(c)通过液相色谱质谱分析即LC-MS来检测利用选择性蛋白酶解而得到的肽片段的步骤，

在步骤(a)之后，还包括(a’)进行在酸性条件下的还原反应的步骤，

其中，在pH2.5以下的强酸性条件下实施步骤(a’)；

所述蛋白酶为胰蛋白酶，所述单克隆抗体选自由利妥昔单抗、本妥昔单抗、纳武单抗、曲妥珠单抗、英夫利昔单抗、美泊利单抗、莫加木珠单抗和托珠单抗组成的组中的任一种。