[发明专利]结合测定

说明书

描述了用于测定包含淋巴细胞活化基因‑3(LAG‑3)蛋白或其片段、衍生物或类似物的制剂的MHC II类结合活性的方法。所述方法包括使用生物层干涉术(BLI)测定所述LAG‑3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHC II类分子的结合。所述方法可以用作所述化合物的良好生产规范(GMP)级生产中的质量控制测定。还描述了用于进行所述方法的探针和试剂盒。

相关申请的交叉引用

本申请要求申请号为201611180971.4、标题为“结合测定”、在2016年12月19日提供于中国专利局的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用并入本文中。

技术领域

本发明涉及用于测定淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)蛋白或其片段、衍生物或类似物制剂的MHC II类结合活性的方法，以及用于所述方法中的探针和试剂盒。

背景技术

LAG-3蛋白是具有四个细胞外免疫球蛋白超家族结构域的CD4I同源型膜蛋白。与CD4相似，LAG-3在T细胞的表面处低聚化，并且结合抗原递呈细胞(APC)上的MHC II类分子，但具有比CD4显著更高的亲和力。LAG-3在活化的CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞上表达，其中它与细胞表面处的CD3/T细胞受体复合物缔合并且负向调节信号转导。因此，它负向调节T细胞增殖、功能和体内平衡。与效应或记忆T细胞相比，LAG-3在耗竭的T细胞上被上调。LAG-3也在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)上被上调，并且使用抗LAG-3抗体阻断LAG-3可以增强抗肿瘤T细胞应答。

IMP321是重组的、可溶性LAG-3Ig融合蛋白，其以高亲合力结合MHC II类。它是靶向MHC II类阳性抗原递呈细胞(APC)的第一类免疫增强剂(Fougeray等：A soluble LAG-3protein as an immunopotentiator for therapeutic vaccines:Preclinicalevaluation of IMP321.Vaccine 2006,24:5426-5433；Brignone等：IMP321(sLAG-3)safety and T cell response potentiation using an influenza vaccine as a modelantigen:A single-blind phase I study.Vaccine 2007,25:4641-4650；Brignone等：IMP321(sLAG-3),an immunopotentiator for T cell responses against a HBsAgantigen in healthy adults:a single blind randomised controlled phase Istudy.J Immune Based Ther Vaccines 2007,5:5；Brignone等：A soluble form oflymphocyte activation gene-3(IMP321)induces activation of a large range ofhuman effector cytotoxic cells.J Immunol 2007,179:4202-4211)。IMP321已在先前治疗的晚期肾细胞癌患者中测试，已知在通过3个月之内的重复注射所治疗的所有患者中，IMP321是免疫抑制性的并且显示出诱导循环活化的CD8T细胞和长寿命的效应记忆CD8T细胞的百分比增加，而没有任何可检测的毒性(Brignone等：A phase I pharmacokineticand biological correlative study of IMP321,a novel MHC class II agonist inpatients with advanced renal cell carcinoma.Clin Cancer Res 2009,15:6225-6231)。仅几个ng/mL浓度的IMP321已显示在体外对APC是具有活性的，这显示了IMP321作为免疫系统的激动剂的巨大潜力(Brignone,等,2009,同上)。