[发明专利]免疫细胞无血清培养用培养基添加试剂盒、使用该试剂盒的免疫细胞培养方法、通过该试剂盒或培养方法获得的免疫细胞无血清培养液以及包含该培养液的化妆材料组合物

说明书

本发明涉及适用于免疫疗法的自然杀伤细胞培养技术，更具体而言，涉及与现有的免疫细胞培养方法相比，即便是采血后经过1天以上或极为衰弱的免疫细胞，也能够实现有效率的扩增以及激活的同时，显著增加NK细胞所占比率进行培养的免疫细胞无血清培养用培养基添加试剂盒、利用该试剂盒的免疫细胞培养方法、通过该试剂盒或培养方法获得的免疫细胞无血清培养液以及包含该培养液的化妆材料组合物。

技术领域

本发明涉及适用于免疫疗法的自然杀伤细胞(Natural Killer cell；NK细胞)培养技术，更具体而言，涉及一种与现有的免疫细胞培养方法相比，即便是采血后经过1天以上或极为衰弱的免疫细胞，也能够实现有效率的扩增以及激活的同时，显著增加NK细胞所占比率后，根据用途来确定是否使用血清，能够以选择性地包含或不包含血清的状态进行培养的免疫细胞无血清培养用培养基添加试剂盒、利用该试剂盒的免疫细胞培养方法、通过该试剂盒或培养方法获得的免疫细胞无血清培养液以及包含该培养液的化妆材料组合物。

背景技术

哺乳动物的免疫系统包括多个独特的细胞，这些细胞起到防御细菌、病毒、毒素以及其他非-宿主物质入侵宿主的作用。对免疫系统的特异性起到主要作用的细胞类型称作淋巴球，淋巴球中具有B细胞、T细胞以及称作自然杀伤细胞的NK细胞。T细胞的命名源于产生自胸腺，B细胞的命名源于产生自骨髓，NK细胞自产生具备能够准确区分自身和外界的能力，及时找出非自身之物并去除，因此称作自然杀伤(NK)细胞。T细胞群中具有诸如抑制性T细胞(suppressor T cell)、细胞毒性T细胞以及辅助性T细胞等多种亚群。辅助性T细胞亚群决定Th1以及Th2两种免疫途径。Th1细胞(CD4+细胞的功能亚群)的特征在于提升细胞介导免疫反应的能力。Th1细胞产生细胞因子IL-2以及干扰素-γ。虽然Th2细胞也是CD4+细胞，但是与Th1细胞有所区别。Th2细胞负责产生抗体，并产生细胞因子IL-4、IL-5、IL-10以及IL-13。这些细胞因子在相互阻碍Th1以及Th2反应中起到重要的作用。

在免疫疗法中激活的免疫细胞中，尤其NK细胞是作为一种特征性形态的大颗粒淋巴细胞(LGL，Large granular lymphocyte)，具有杀死被感染病毒、肿瘤细胞的能力突出且不杀死大部分正常细胞的特性，所述NK细胞的抗肿瘤作用通过坏死(necrosis)或细胞凋亡(apoptosis)或通过同时产生这两种作用机理来实现。NK细胞与IL-2、IL-12、干扰素(Interferon)等细胞因子(cytokine)反应，由此提供效价(细胞毒性，cytotoxicity)、分泌性(secretory)、增殖性(proliferative)机能。在人体中，NK细胞的表现型(phenotype)是CD16(FcγRIII)及CD56，由于细胞表面上没有T细胞受体复合物(TRC，T-cell receptorcomplex)，CD16和CD56被用作NK细胞的标志物(marker)。

已知这种NK细胞在早期生物体防御系统和人体肿瘤免疫中起到重要的作用。即，NK细胞即便没有基于主要组织相容性复合体(Major Histoc ompatibility Complex：MHC)的表达的免疫获取过程，也能杀伤特定自体细胞、同源细胞、甚至异源癌细胞，尤其能够更容易地杀死对Class1MHC表达较少或不表达的靶细胞。因此，NK细胞能够有效杀死不表达MHC的大部分的癌细胞，除此之外，还能够杀死被几种病毒感染的细胞和伤寒沙门菌(salmonella typhi)等细菌。

但是，即使对于正常人而言，这样对杀伤癌细胞起到卓越作用的NK细胞仅占据外周血淋巴球的5～25％，尤其对于癌患者而言，该比率降低至不足5％，因此，若没有通过免疫疗法的额外的扩增过程，则有效攻击癌细胞受限制。