[发明专利]残余肿瘤浸润淋巴细胞及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种制备用于过继性T细胞疗法的残余肿瘤浸润淋巴细胞rTIL的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)从患者获得肿瘤组织，其中，肿瘤组织包含肿瘤浸润淋巴细胞TIL；

(b)破碎所述肿瘤组织；

(c)在透气性容器中，用第一细胞培养基和白细胞介素2(IL-2)处理肿瘤组织，提供肿瘤残余物和新生TIL(eTIL)；

(d)移除至少多个eTIL；

(e)使用消化混合物将肿瘤残余物酶消化为肿瘤残余细胞；以及

(f)在透气性容器中，用包含细胞培养基、经辐照的饲养细胞、OKT-3抗体和IL-2的第二细胞培养基扩增肿瘤残余细胞，提供数量扩增的残余肿瘤浸润淋巴细胞rTIL；

其中，相对于eTIL，rTIL表达T细胞衰竭标志物的水平降低，所述T细胞衰竭标志物选自TIM3、LAG3、TIGIT、PD-1、CTLA-4，以及它们的组合。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述肿瘤组织选自：黑素瘤肿瘤组织、头颈部肿瘤组织、乳腺肿瘤组织、肾肿瘤组织、胰腺肿瘤组织、胶质母细胞瘤肿瘤组织、肺肿瘤组织、结直肠肿瘤组织、肉瘤肿瘤组织、三阴性乳腺肿瘤组织、宫颈肿瘤组织、卵巢肿瘤组织和急性髓样白血病骨髓或肿瘤组织。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述经辐照的饲养细胞包括经辐照的同种异体外周血单核细胞。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，IL-2以约3000IU/mL的初始浓度存在于第二细胞培养基中，OKT-3抗体以约30ng/mL的初始浓度存在于第二细胞培养基中。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，相对于eTIL，rTIL中的CD8⁺和CD4⁺T细胞的至少一种T细胞衰竭标志物减少至少10％。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，T细胞衰竭标志物是CD8⁺T细胞中的LAG3标志物，相对于eTIL，rTIL中的LAG3标志物减少至少2倍。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，T细胞衰竭标志物是CD8⁺T细胞中的TIM3标志物，相对于eTIL，rTIL中的LAG3标志物减少至少3倍。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，T细胞衰竭标志物是CD4⁺T细胞中的TIM3标志物，相对于eTIL，rTIL中的LAG3标志物减少至少2倍。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，通过流式细胞术检测不到rTIL中的TIM3标志物和LAG3标志物。

10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，相对于eTIL中的CD56⁺表达，rTIL中的CD56⁺表达减少至少3倍。

11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中，相对于eTIL中的CD69⁺表达，rTIL中的CD69⁺表达增加至少2倍。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，消化混合物包含脱氧核糖核酸酶、胶原酶和透明质酸酶。

13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中，所述第一细胞培养基还包含细胞因子，所述细胞因子选自IL-4、IL-7、IL-15、IL-21，以及它们的组合。

14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中，所述第二细胞培养基还包含细胞因子，所述细胞因子选自IL-4、IL-7、IL-15、IL-21，以及它们的组合。