[发明专利]网织红细胞模拟粒子、血小板模拟粒子制备方法及质控物

说明书

一种网织红细胞模拟粒子、血小板模拟粒子制备方法及质控物。网织红细胞模拟粒子制备方法，采用N‑羟基琥珀酰亚胺活化的蛋白荧光染料，对体积60‑120fL的哺乳动物无核红细胞染色，并对无核红细胞固定处理，制成网织红细胞模拟粒子。血小板模拟粒子制备采用体积2‑25fL的哺乳动物无核红细胞，其余与网织红细胞模拟粒子相同。制备方法包括：采用N‑羟基琥珀酰亚胺活化的蛋白荧光染料对不同体积的哺乳动物无核红细胞染色，分别获得网织红细胞模拟粒子和血小板模拟粒子，其散点图荧光与体积方向接近新鲜血网织红细胞、网织血小板和血小板散点图分布；制备的模拟粒子稳定性好，不干扰其它细胞粒子的计数分类。

技术领域

本申请涉及血液质控物领域，特别是涉及一种网织红细胞模拟粒子制备方法、血小板模拟粒子制备方法，以及包含所制备的网织红细胞模拟粒子和血小板模拟粒子的质控物。

背景技术

网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，是反映骨髓红系造血功能以及判断贫血和相关疾病疗效的重要指标，对血液病的诊断和治疗反应观察均有重要意义。网织红细胞相关参数是中、高端血细胞分析仪提供的一项重要信息。血液质控物是一种含有单一或多组分血细胞或血细胞模拟物的液体，具备如同血液一样的可检测特性，用于日常监控血液分析仪的准确性和精确性。网织红细胞模拟粒子和血小板模拟粒子就是血液质控物中分别模拟网织红细胞和血小板的血细胞模拟物。

网织红细胞模拟粒子存在多种制备方法，方法一：通过渗透压的变化使红细胞的胞膜膨胀，产生小孔，然后将核酸注入胞内，模拟网织红细胞的形态；该制备方法对工艺要求高，工艺操作难度大，量产效率较低，并且，细胞经过了涨缩，其膜强度降低。方法二：通过富集提纯贫血动物，如：猪，的血液中网织红细胞，固定剂处理实现粒子稳定性，该制备方法网织红细胞提纯难度大，动物血原材料成本较高，且粒子体积参数无法有效模拟人网织红细胞分布。方法三：通过氧化外源核酸，形成醛基与人红细胞膜表面交联，实现粒子荧光信号模拟，该方法的工艺步骤过多，反应条件复杂不可控，降低了工艺实用性及可控性。

血小板模拟粒子也存在多种制备方法。方法一：以人源血小板为原材料，通过使用聚乙二醇(缩写PEG)增强血小板稳定性，该制备方法血小板易活化进而引发聚集效应，导致质控品失效，同时人源血小板商业来源价格昂贵。方法二：采用低成本的山羊红细胞为原材料制备血小板模拟粒子，该方法可以减少人源血小板的聚集效应，但是，该方法需要对山羊红细胞进行皱缩处理，以调整其体积大小来制备血小板模拟粒子，无法有效模拟人血小板体积分布，并且，皱缩的羊红细胞在等渗的保存液中存在形变恢复的趋势。方法三：采用不同红细胞体积特征的山羊血混合，模拟人血小板体积分布，但其加工工艺过于复杂，同时因固定后的血小板粒子会对溶血剂有抗溶作用，当含有血小板和白细胞的质控物用于检测时，该方法制备的血小板模拟粒子，会导致白细胞计数假性升高，影响质控的准确性。方法四：通过弱固定动物血红细胞，满足溶血剂作用下可溶解需求，然后通过不同渗透压环境下调至体积大小，混合不同体积大小的红细胞，实现近似人血小板体积分布，但工艺实用性及可控性仍然是较大挑战。

因此，亟需一种简单、经济，而又适用于工业化生产的网织红细胞模拟粒子和血小板模拟粒子的制备方法，以满足血液质控物的生产和使用需求。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的网织红细胞模拟粒子、血小板模拟粒子的制备方法，以及含有所制备的网织红细胞模拟粒子和血小板模拟粒子的质控物。

为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：

本申请的一方面公开了一种网织红细胞模拟粒子的制备方法，包括采用N-羟基琥珀酰亚胺活化的具有羧基的蛋白荧光染料，对哺乳动物无核红细胞进行染色，并对哺乳动物无核红细胞进行固定处理，制成网织红细胞模拟粒子；其中，固定处理可以在染色前或染色后进行，哺乳动物无核红细胞的体积大小为60-120fL，哺乳动物无核红细胞优选为人源红细胞、兔红细胞、牛红细胞、猪红细胞、马红细胞或豚鼠红细胞。