[发明专利]网织红细胞模拟粒子、血小板模拟粒子制备方法及质控物

权利要求书

1.一种网织红细胞模拟粒子的制备方法，其特征在于：采用N-羟基琥珀酰亚胺活化的具有羧基的蛋白荧光染料，对哺乳动物无核红细胞进行染色，并对所述哺乳动物无核红细胞进行固定处理，制成网织红细胞模拟粒子；所述固定处理可以在染色前或染色后进行，所述哺乳动物无核红细胞的体积大小为60-120fL。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述哺乳动物无核红细胞为人源红细胞、兔红细胞、牛红细胞、猪红细胞、马红细胞或豚鼠红细胞。

3.一种血小板模拟粒子的制备方法，其特征在于：采用N-羟基琥珀酰亚胺活化的具有羧基的蛋白荧光染料，对哺乳动物无核红细胞进行染色，并对所述哺乳动物无核红细胞进行固定处理，制成血小板模拟粒子；所述固定处理可以在染色前或染色后进行，所述哺乳动物无核红细胞体积大小为2-25fL。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述哺乳动物无核红细胞为山羊源红细胞或绵羊红细胞。

5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于：所述采用N-羟基琥珀酰亚胺活化的具有羧基的蛋白荧光染料，对哺乳动物无核红细胞进行染色，包括以下步骤，

提取所述哺乳动物无核红细胞；

提供经N-羟基琥珀酰亚胺活化的蛋白荧光染料，所述蛋白荧光染料中具有可供活化的羧基，所述羧基被N-羟基琥珀酰亚胺活化；

将所述N-羟基琥珀酰亚胺活化的蛋白荧光染料与所述哺乳动物无核红细胞孵育，对所述哺乳动物无核红细胞进行染色，获得染色的红细胞。

6.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于：还包括对经过染色和固定的细胞进行洗涤。

7.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于：所述N-羟基琥珀酰亚胺活化的具有羧基的蛋白荧光染料为通式一所示结构，

通式一

通式一中，R为蛋白荧光染料，n为1-4的整数，n值取决于所述蛋白荧光染料的羧基个数。

8.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于：所述蛋白荧光染料为通式二、通式三、通式四和通式五所示结构的至少一种，

通式二

通式三

通式四

通式五

通式二至通式五中，m为0、1、2或3，R₁、R₂各自独立地选自磺酸基、卤素原子或者氢原子；

R₃和R₄各自独立地选自烷基或含羧基的烷基，并且，R₃和R₄中至少有一个为含羧基的烷基；

R₅、R₆各自独立地选自磺酸基、卤素原子、烷基或者氢原子。

9.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于：所述蛋白荧光染料为荧光染料A-H中的至少一种，

荧光染料A的结构式为

荧光染料B的结构式为

荧光染料C的结构式为

荧光染料D的结构式为

荧光染料E的结构式为

荧光染料F的结构式为

荧光染料G的结构式为

荧光染料H的结构式为

10.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于：所述固定处理采用的固定剂为重金属盐、甲醛、丙酮醛、戊二醛和多聚甲醛中的至少一种。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：所述甲醛、丙酮醛、戊二醛或多聚甲醛的反应浓度为体积比0.005％-1％。

12.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：所述重金属盐为重铬酸盐。

13.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：所述重金属盐为重铬酸钾或重铬酸。