[发明专利]用磁性颗粒分离高纯度核酸的方法

权利要求书

1.一种从样品溶液分离核酸的方法，其中从样品溶液分离核酸是通过吸附到磁性颗粒，然后通过施加磁场从样品溶液中分离具有吸附于其上的核酸的磁性颗粒，接着进行至少一个洗涤步骤(w)，包括：

(w1)将具有吸附其上的核酸的磁性颗粒悬浮于洗涤液中，其是水性溶液，其具有小于100mM的总盐浓度且不含有机溶剂，

(w2)在洗涤溶液中孵育具有吸附于其上的核酸的磁性颗粒，和

(w3)从洗涤溶液分离具有吸附于其上的核酸的磁性颗粒。

2.如权利要求1所述的方法，其中核酸是DNA、RNA或两者，DNA和RNA，优选DNA。

3.如前述权利要求中至少一项所述的方法，其中洗涤溶液具有低于25mM的总盐浓度。

4.如前述权利要求中至少一项所述的方法，其中洗涤溶液由水和可任选的盐组成。

5.如前述权利要求中至少一项所述的方法，其中洗涤步骤(w)进行5分钟或更短。

6.如前述权利要求中至少一项所述的方法，其中核酸，优选DNA，分别具有至少10kb或kbp的链长度。

7.如权利要求1-5中至少一项所述的方法，其中核酸，优选DNA，分别具有小于10kb或kbp的链长度，其中洗涤步骤(w)进行2分钟或更短。

8.如前述权利要求中至少一项所述的方法，其中洗涤步骤(w)具有以下一个或多个特征：

-其上结合有核酸的磁性颗粒不经受机械力，

-其上结合有核酸的磁性颗粒不经受振荡和/或水平施加的机械力，

-其上结合有核酸的磁性颗粒经受垂直施加的机械力，优选重力，

-其上结合有核酸的磁性颗粒经受磁力，优选垂直施加的磁力，

-其上结合有核酸的磁性颗粒悬浮在洗涤溶液中，而不施加机械力，

-其上结合有核酸的磁性颗粒悬浮在洗涤溶液中，而不施加振荡和/或水平施加的机械力，

-其上结合有核酸的磁性颗粒悬浮在洗涤溶液中，且施加垂直施加的机械力，优选重力，

-其上结合有核酸的磁性颗粒悬浮在洗涤溶液中，且施加磁力，优选垂直施加的磁力。

9.如前述权利要求中至少一项所述的方法，洗涤步骤(w)前在至少一个预洗涤步骤(p)中用洗涤溶液洗涤其上吸附有核酸的磁性颗粒，洗涤溶液是含有高于500mM的总盐浓度和/或包含有机溶剂的水性溶液。

10.如前述权利要求中至少一项所述的方法，其中洗涤步骤(w)后用洗脱溶液从磁性颗粒洗脱核酸。

11.如前述权利要求中至少一项所述的方法，其中磁性颗粒包含二氧化硅。

12.如前述权利要求中至少一项所述的方法，其中样品溶液包含离液盐和/或醇。

13.如前述权利要求中至少一项所述的方法，包括步骤：

(a)在含有核酸的样品溶液中加入磁性颗粒，

(b)孵育步骤(a)的样品溶液使核酸吸附到磁性颗粒，

(c)在来自步骤(b)的样品溶液上施加磁场以固定其上吸附有核酸的磁性颗粒，

(d)除去样品溶液，

(e)在权利要求1的洗涤步骤(w)中用洗涤溶液洗涤磁性颗粒，和

(f)可任选的，用洗脱溶液从所述磁性颗粒洗脱核酸。

14.如前述权利要求中至少一项所述的方法，其中该方法是自动化方法。

15.一种水性溶液的用途，其具有小于100mM的总盐浓度且不含有机溶剂，用作在从样品溶液分离核酸的方法中洗涤其上吸附有核酸的磁性颗粒的洗涤溶液，其中其上吸附有核酸的磁性颗粒悬浮于洗涤溶液。