[发明专利]核碱基编辑器的AAV递送

权利要求书

1.组合物，其包含：

(i)第一核苷酸序列，其编码在C-末端与内含肽-N融合的Cas9蛋白的N-末端部分；和

(ii)第二核苷酸序列，其编码与所述Cas9蛋白的C-末端部分的N-末端融合的内含肽-C，

其中所述第一核苷酸序列或第二核苷酸序列与编码至少一个二分核定位信号的核苷酸序列可操作地连接。

2.权利要求1的组合物，其中所述Cas9蛋白的N-末端部分包含对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1-573或1-637的SEQ ID NO:1-275和394-397的任一个的部分。

3.权利要求1或权利要求2的组合物，其中所述Cas9蛋白的C-末端部分包含对应于SEQID NO:1的氨基酸574-1368或638-1368的SEQ ID NO:1-275和394-397的任一个的部分。

4.权利要求1-3中任一项的组合物，其中所述内含肽-N包含如SEQ ID NO:350-351和354-355的任一个中所示的氨基酸序列。

5.权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述内含肽-C包含如SEQ ID NO:352-353和356-357的任一个中所示的氨基酸序列。

6.权利要求1-5中任一项的组合物，其中所述第一核苷酸序列或所述第二核苷酸序列进一步包含与启动子可操作地连接的编码指导RNA(gRNA)的核苷酸。

7.权利要求1-6中任一项的组合物，其中所述第一核苷酸序列或所述第二核苷酸序列进一步包含转录终止子。

8.权利要求7的组合物，其中所述转录终止子是来自bGH基因、hGH基因或SV40基因的转录终止子。

9.权利要求8的组合物，其中所述转录终止子是来自bGH基因的转录终止子。

10.权利要求1-9中任一项的组合物，其中所述第一核苷酸序列或所述第二核苷酸序列进一步包含插入所述转录终止子的5′的土拨鼠肝炎转录后调控元件(WPRE)。

11.权利要求1-10中任一项的组合物，其中所述二分核定位信号包含选自下组的氨基酸序列：KRPAATKKAGQAKKKK(SEQ ID NO:344)、KKTELQTTNAENKTKKL(SEQ ID NO:345)、KRGINDRNFWRGENGRKTR(SEQ ID NO:346)和RKSGKIAAIVVKRPRK(SEQ ID NO:347)。

12.权利要求11的组合物，其中所述二分核定位信号包含如SEQ ID NO:344中所示的氨基酸序列。

13.权利要求1-12中任一项的组合物，其中所述Cas9蛋白是催化无活性的Cas9(dCas9)或Cas9切口酶(nCas9)，并且其中(i)的所述第一核苷酸序列进一步包含编码核碱基修饰酶的核苷酸序列，所述核碱基修饰酶与所述Cas9蛋白的N-末端部分的N-末端融合。

14.权利要求1-12中任一项的组合物，其中所述Cas9蛋白是催化无活性的Cas9(dCas9)或Cas9切口酶(nCas9)，并且其中(ii)的所述第二核苷酸序列进一步包含编码核碱基修饰酶的核苷酸序列，所述核碱基修饰酶与所述Cas9蛋白的C-末端部分的C-末端融合。

15.权利要求13或14的组合物，其中所述核碱基修饰酶是脱氨酶。

16.权利要求15的组合物，其中所述脱氨酶是胞嘧啶脱氨酶。

17.权利要求15的组合物，其中所述脱氨酶是腺苷脱氨酶。