[发明专利]抑制CD39表达的免疫抑制恢复寡核苷酸

说明书

本发明涉及包含12至18个核苷酸的免疫抑制恢复寡核苷酸，其中至少一个核苷酸被修饰，并且该寡核苷酸与SEQ ID NO.1(人)的外核苷酶(NTPdase；CD73)的核酸序列杂交，其中该寡核苷酸抑制至少50％的CD39表达。本发明还涉及包含这种寡核苷酸的药物组合物。

技术领域

本公开涉及与外核苷三磷酸二磷酸水解酶-1(ENTPD1或CD39)的核酸序列杂交的免疫抑制恢复寡核苷酸，以及包含这种免疫抑制恢复寡核苷酸和药用载体、赋形剂和/或稀释剂的药物组合物。

背景技术

近年来，通过应用免疫疗法，特别是通过所谓的“免疫检查点”的抑制剂，对如恶性肿瘤的几种不同疾病的治疗非常成功。这些检查点是免疫系统中的分子，其上调(共刺激分子)或下调信号。治疗方法的概念基于内源性抗肿瘤免疫反应的激活。例如，许多癌症分别通过抑制T细胞和NK细胞活性来保护自己免受免疫系统的侵害。免疫检查点调节剂，即刺激剂或抑制剂，例如针对CTLA-4、PD-1、PD-L1、LAG-3、VISTA、A2AR、BTLA、IDO、CD39、CD73、STAT3、TDO2、TIM-3、MICA、NKG2A、KIR、TIGIT、TGF-β、Ox40、GITR、CD27、CD160、2B4和4-1Bb中的一种或多种。

CD39需要被认为是改进对不同类型癌症的免疫力的一种新颖且有前景的候选物。CD39是一种外核苷酶(NTPdase)，负责将ATP转化为ADP，和将ADP转化为AMP。其与外核苷酶CD73协同作用，CD73将AMP降解为免疫抑制性腺苷。

CD39在不同的免疫细胞上广泛表达为单核细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、B淋巴细胞、树状细胞(DC)、自然杀伤细胞(NK)的一些亚群和T细胞。主要是T reg细胞突出表达CD39和CD73，使它们能够产生腺苷以抑制T细胞反应。此外，已经在许多不同的肿瘤(实体和血液肿瘤)和肿瘤相关免疫细胞中发现了增强的CD39表达水平。例如，在黑色素瘤中，已经在黑色素细胞上研究了增加的CD39表达，并且发现其与它们分化成恶性细胞有关。此外，在来自肾、肺、睾丸、甲状腺肿瘤以及淋巴瘤的癌细胞上研究了增强的CD39 mRNA和蛋白质水平。不同肿瘤中的这些增加的CD39的表达水平强烈表明该外核苷酶在肿瘤诱发、生长和免疫抑制微环境介导中的重要作用。

垂死的癌细胞将ATP释放到肿瘤微环境中的细胞外空间。由于免疫抑制性腺苷的产生，活肿瘤细胞可从ATP中获益。由此，肿瘤细胞能够进行不受控制的增殖和扩增。如上所述，不同的肿瘤细胞或肿瘤相关的免疫细胞显示出有效的CD39和CD73表达，导致肿瘤微环境中腺苷水平的增加。通过与淋巴细胞上的A_2A或A_2B受体结合，腺苷介导对这些细胞的免疫抑制信号。例如，T细胞的增殖、细胞毒性细胞因子产生和激活受到抑制。NK细胞显示出降低的细胞毒性潜力。腺苷诱导巨噬细胞中的替代激活(免疫抑制性M2表型)，导致促炎性细胞因子产生减少，但免疫抑制性细胞因子IL-10的产生增加。CD39作为相关治疗靶标在不同肿瘤中的重要作用由以下事实强调：使用CD39和CD73敲除小鼠的肿瘤模型显示出改善的疾病结果。

然而，CD39的抑制很可能比单独CD73的抑制更有效，以增强抗肿瘤免疫应答。一方面，因为CD39的阻断会导致肿瘤微环境中腺苷水平降低。另一方面，肿瘤微环境中的高ATP水平可以充当DC、巨噬细胞及其介导免疫刺激信号的前体的“发现我”信号。

ATP与DC上的P2X₇受体结合并激活它们以释放促炎细胞因子如IL-1β或IL-28。这些细胞因子转而激活NK细胞、T细胞和巨噬细胞并增强它们的增殖、细胞毒性和成熟。因此，T细胞受体(TCR)的参与导致T细胞激活期间的ATP释放。该ATP可以通过P2X受体以自分泌的方式起作用，以增强TCR触发的激活和IL-2的产生。相同的ATP可能通过P2X受体以旁分泌的方式作用于邻近的淋巴细胞，以抑制它们在淋巴结中的运动，从而增强T细胞和APC之间的相互作用。总之，增加肿瘤微环境中的ATP水平为启动最佳抗肿瘤免疫应答设定了完美条件。