[发明专利]丝状菌变异株及使用其的C4二羧酸的制造方法

说明书

本发明提供一种具有C4二羧酸生产能力提高效果的丝状菌变异株、及使用有该丝状菌变异株的C4二羧酸的制造方法。本发明的C4二羧酸的制造方法，其包括：将由序列号2所示的氨基酸序列或与该序列具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成、且具有过氧化氢酶活性的多肽的表达被强化的丝状菌变异株进行培养。

技术领域

本发明涉及一种丝状菌变异株及使用其的C4二羧酸的制造方法。

背景技术

C4二羧酸作为酸味料或抗菌剂、pH调节剂在食品工业中被利用于各种各样的用途，此外，也用作合成树脂或生物分解性聚合物的原料使用等，为工业的价值高的物质。C4二羧酸通过工业上源自石化原料的化学合成、或微生物发酵的任一种来制造。从前，为了更低成本，化学合成法为主流，但近年来，从原料的昂贵、或环境负荷等的观点出发，通过以循环再生资源为原料的微生物发酵的制造方法备受关注。

已知有作为C4二羧酸之一的富马酸可以使用根霉属菌(Rhizopus)等发酵菌而制造。根霉属菌以葡萄糖为碳源生产富马酸，排出至菌体外。迄今为止，关于用于根霉属菌的富马酸高生产化的方法，已知有利用培养法的改良或变异育种的高生产率菌株的制作等。但是，根霉属菌的遗传学的背景还没有充分地研究，因此，利用基因重组的根霉属菌的富马酸高生产化技术的开发不容易，报道也少。仅报道有将编码源自酿酒酵母的丙酮酸羧化酶的基因导入至戴尔根霉(专利文献1)、及将编码源自大肠杆菌的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶的基因导入至米根霉(非专利文献1)导致的富马酸生产率提高。

专利文献1：中国专利申请公开第103013843号说明书

非专利文献1：Metabolic Engineering,2012,14:512-520

发明内容

本发明涉及以下的[1]～[4]。

[1]一种C4二羧酸的制造方法，其中，包括：将丝状菌变异株进行培养，所述丝状菌变异株由序列号2所示的氨基酸序列或与该序列具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成、且具有过氧化氢酶活性的多肽的表达被强化。

[2]一种丝状菌变异株，其中，过氧化氢酶的表达被强化。

[3]一种丝状菌变异株的制造方法，其中，包括：在宿主丝状菌中，将选自以下的1)～4)中的多核苷酸以可表达的方式导入、或强化该多核苷酸的表达，

1)编码由序列号2所示的氨基酸序列构成的多肽的多核苷酸，

2)由与序列号2具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成、且编码具有过氧化氢酶活性的多肽的多核苷酸，

3)由序列号1所示的核苷酸序列构成的多核苷酸，

4)由与序列号1所示的核苷酸序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成、且编码具有过氧化氢酶活性的多肽的多核苷酸。

[4]一种C4二羧酸生产能力的提高方法，其中，包括：在宿主丝状菌中，将选自以下的1)～4)中的多核苷酸以可表达的方式导入、或强化该多核苷酸的表达，

1)编码由序列号2所示的氨基酸序列构成的多肽的多核苷酸，

2)由与序列号2具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成、且编码具有过氧化氢酶活性的多肽的多核苷酸，

3)由序列号1所示的核苷酸序列构成的多核苷酸，

4)由与序列号1所示的核苷酸序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成、且编码具有过氧化氢酶活性的多肽的多核苷酸。

具体实施方式

本发明涉及提供一种具有C4二羧酸生产能力提高效果的丝状菌变异株、及使用有该丝状菌变异株的C4二羧酸的制造方法。