[发明专利]结肠类器官及其制备和使用方法

说明书

本文公开了通过调节信号传导途径将前体细胞体外分化成定形内胚层的方法，所述定形内胚层可进一步分化成人类结肠类器官(HCO)。进一步公开了HCO和使用HCO的方法，其可以使用，例如，对于HCO可以用于确定潜在治疗剂对选自结肠炎、结肠癌、息肉综合征和/或肠易激综合征的疾病的功效和/或毒性。

相关申请的交叉参考

本申请要求2016年12月5日提交的美国临时申请序列号62/429,948的权益，其全部内容通过引用并入本文用于所有目的。

背景技术

虽然由多能干细胞(PSC)产生胃和小肠类器官已经彻底改变了人类胃肠(GI)发育和疾病的研究，但是产生大肠类器官的努力已经落后，部分原因是由于缺乏对后肠管发育的稳健理解。

发明内容

本文公开了通过调节信号传导途径将前体细胞体外分化成定形内胚层的方法，所述定形内胚层可进一步分化成人类结肠类器官(HCO)。进一步公开了HCO和使用HCO的方法，其可以使用，例如，对于HCO可以用于确定潜在治疗剂对选自结肠炎、结肠癌、息肉综合征和/或肠易激综合征的疾病的功效和/或毒性。

附图说明

本申请文件含有至少一个彩色绘图。具有彩色附图的本专利或专利申请公开的副本将在请求和支付必要费用后由主管局提供。

本领域技术人员将理解，下面描述的附图仅用于说明目的。附图并不旨在以任何方式限制本教导的范围。

图1.Bmp信号传导调节小鼠和青蛙胚胎中的Satb2表达。(A)对e8.5小鼠胚胎进行的整体pSmad158(红色)和Foxa2(绿色)染色，其示出在发育中的后肠周围的核染色(n＝6)。(B)来自(A)中的加框区域的光学切片的插图，其示出在后肠中胚层和内胚层(D，背侧；V，腹侧)中进行的pSmad1/5/8染色。(C)在头褶阶段分离并在使用或不用DMH-1进行Bmp抑制的情况下培养2天的小鼠胚胎的示意图。(D，E)在培养48小时后，对DMSO(0)和DMH-1(E)处理的胚胎进行的整体pSmad1/5/8(红色)和Foxa2(绿色)染色。(F)在于DMSO或DMH-1中培养的胚胎中进行的pSmad1/5/8和pSmad2/3染色相对于Cdx2的量化(每种条件，n＝3个胚胎)。(G-J)在于DMSO(G，H)或DMH-1(I，J)中培养2天后，对小鼠胚胎进行的Cdx2(绿色)、Satb2(红色)和Foxa2(白色)的整体免疫染色(对于每种条件，n＝6)。H-J中的箭头指向卵黄柄的大致位置(BA1，第一臂肱弓)。(K)用DMSO或DMH-1处理的小鼠胚胎中Satb2表达的量化。(L)热带爪蟾胚胎中Bmp抑制的示意图。用DMSO(M)或DMH-1(R)处理的热带爪蟾胚胎中Satb2的原位杂交。(M)和(R)中的白色虚线描绘了使用后续分析的截面平面。mx和md＝第一臂肱弓的上颌突和下颌突。Cba＝尾侧臂肱弓。来自用DMSO(N-Q)或DMH-1(S-V)处理的热带爪蟾胚胎的Satb2(红色)、pSmad1/5/8(绿色)、DAPI(蓝色)和颜色合并图像的免疫荧光。比例尺在G-H中为＝100μm，在所有其它图中为50μm。对于双尾t检验，**p<0.01和***p 0.001。