[发明专利]从微藻中纯化重组骨桥蛋白的方法有效
| 申请号： | 201780073205.4 | 申请日： | 2017-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN109996810B | 公开（公告）日： | 2023-08-22 |
| 发明（设计）人： | 米勒·特朗;迈克尔·玛菲尔德;杰瑞米·菲尔拉拉 | 申请（专利权）人： | 特里同阿盖亚创新公司 |
| 主分类号： | C07K14/52 | 分类号： | C07K14/52;C12N15/74;C12N15/82 |
| 代理公司： | 北京派特恩知识产权代理有限公司 11270 | 代理人： | 王子晔;姚开丽 |
| 地址： | 美国加*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微藻中 纯化 重组 蛋白 方法 | ||
1.用于获得经纯化的重组骨桥蛋白的方法，所述方法包括：
获得表达重组骨桥蛋白(rOPN)的转基因微藻，其中所述转基因微藻是来自衣藻Chlamydomonas的种，并且其中rOPN在叶绿体中表达；
在具有介于4.3至6.0之间的第一pH的液体环境中破碎所述转基因微藻的细胞结构以产生可溶性和不可溶性细胞部分，其中，所述rOPN在所述可溶性部分中；
分离所述可溶性和不可溶性部分；
在可溶性钙盐存在下将所述可溶性部分的pH增加至介于7.5至8.5之间的第二pH以形成含有所述rOPN的沉淀物和上清液；
分离所述沉淀物与上清液；
在具有介于4.7至5.0之间的第三pH的液体中溶解所述rOPN；
从经溶解的rOPN中除去所述钙盐；
将经溶解的rOPN施加到阴离子交换介质上，其中，所述rOPN结合到所述阴离子交换介质；
从所述阴离子交换介质洗脱结合的rOPN；和
收集所述rOPN以获得经纯化的rOPN。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述rOPN是人OPN、牛OPN、山羊OPN、绵羊OPN或骆驼科OPN。
3.如权利要求1所述的方法，其中，通过冻融、珠打、酸水解、均化、微流化、法式压榨、超声处理、酶处理或氮减压来破碎所述微藻细胞结构。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一pH值为5.0。
5.如权利要求1所述的方法，其中，所述第二pH为8.0。
6.如权利要求1所述的方法，其中，所述可溶性钙盐是氯化钙、柠檬酸钙、硫酸钙、氟化钙、磷酸钙或碳酸钙。
7.如权利要求1所述的方法，其中，所述第三pH为5.0。
8.如权利要求1所述的方法，其中，所述经纯化的rOPN为至少50％纯的。
9.如权利要求1所述的方法，其中，所述经纯化的rOPN为至少90％纯的。
10.如权利要求1所述的方法，其中，所述经纯化的rOPN为至少95％纯的。
11.如权利要求1所述的方法，其中，所述转基因微藻是莱茵衣藻。
12.如权利要求1所述的方法，其中，所述转基因微藻表达重组高尔基体激酶。
13.如权利要求1所述的方法，其中，所述rOPN针对所述叶绿体中表达优化了密码子。
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