[发明专利]细胞微区室和制备方法在审
| 申请号： | 201780071921.9 | 申请日： | 2017-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN110603319A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 马克西姆·法耶尤科斯;凯文·亚历山德里;皮埃尔·纳索伊;劳伦特·可格纳特;格雷·雷希尔;艾万·贝扎尔德 | 申请（专利权）人： | 波尔多大学;法国国家科学研究中心;理论与应用光学研究所 |
| 主分类号： | C12N5/074 | 分类号： | C12N5/074;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 11219 中原信达知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 金海霞;杨青 |
| 地址： | 法国*** | 国省代码： | 法国;FR |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微区 细胞外基质层 细胞 多能细胞 腔周围 水凝胶 制备 | ||
1.细胞微区室，其依次包含被组织在腔周围的：
-至少一层人类多能细胞；
-细胞外基质层；
-水凝胶外层。
2.根据权利要求1所述的细胞微区室，其中所述微区室是封闭的。
3.根据权利要求1或2所述的细胞微区室，其中所述外层包含藻酸盐。
4.根据前述权利要求之一所述的细胞微区室，其中所述微区室具有球形或细长的形状。
5.根据前述权利要求之一所述的细胞微区室，其中所述微区室的直径或最小尺寸在10μm和1mm之间，优选在50μm和500μm之间，更优选小于500μm，甚至更优选小于400μm。
6.根据前述权利要求之一所述的细胞微区室，其中所述细胞密度在1个细胞/微区室和数千个细胞/微区室之间、优选为50个细胞/微区室至1000个细胞/微区室。
7.用于制备根据权利要求1至6之一所述的细胞微区室的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)在含有RHO/ROCK途径抑制剂的培养基中温育人类多能干细胞；
(b)将来自步骤(a)的多能干细胞与细胞外基质混合；
(c)将来自步骤(b)的混合物囊封在水凝胶层中；
(d)将步骤(c)中获得的囊在含有RHO/ROCK途径抑制剂的培养基中培养；
(e)清洗来自步骤(d)的囊以除去所述RHO/ROCK途径抑制剂；
(f)将来自步骤(e)的囊培养3天至20天，优选5天至10天，并任选回收所获得的细胞微区室。
8.根据权利要求7所述的用于制备微区室的方法，所述方法包括以下中间步骤
(a′)优选借助于无酶试剂，在步骤(b)之前解离来自步骤(a)的多能干细胞。
9.用于制备根据权利要求1至6之一所述的细胞微区室的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)将人类分化细胞与细胞外基质和细胞重编程试剂混合；
(b)将来自步骤(a)的混合物囊封在水凝胶层中；
(c)将来自步骤(b)的囊培养10天至40天，并任选回收所获得的细胞微区室。
10.根据权利要求9所述的用于制备细胞微区室的方法，其中来自步骤(b)的每个囊含有1个至500个分化细胞。
11.根据权利要求7至10之一所述的用于制备细胞微区室的方法，所述方法包括以下后续步骤：将在权利要求7的步骤(f)或权利要求9的步骤(c)中获得的细胞微区室冷冻。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于波尔多大学;法国国家科学研究中心;理论与应用光学研究所，未经波尔多大学;法国国家科学研究中心;理论与应用光学研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
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