[发明专利]具有降低的免疫原性的HLA I类缺陷的NK-92细胞

说明书

本文描述了包含减少NK‑92细胞中的β‑2‑微球蛋白(B2M)表达的遗传改变以降低HLA I类表达水平的修饰的NK‑92细胞；产生这些细胞的方法；及使用B2M‑修饰的NK‑92细胞治疗受试者(例如，患有癌症的受试者)的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年9月29日提交的第62/401653号美国临时申请的优先权利益，该申请以引用方式并入本文中。

背景技术

基于细胞的免疫疗法是治疗癌症的有力工具。使用表达嵌合抗原受体的工程化原代T细胞(CAR-T细胞)的淋巴恶性肿瘤患者治疗的早期成功将这一领域推向癌症免疫治疗的前沿。除了CAR-T细胞外，基于NK细胞的使用的免疫疗法也正在开发。

NK-92是在患有非霍奇金斯淋巴瘤的受试者血液中发现和然后离体永生化的细胞溶解性癌细胞系。NK-92细胞来源于NK细胞，但缺乏正常NK细胞所呈现的主要抑制性受体，而同时保留大多数激活受体。然而，NK-92细胞不攻击正常细胞，也不在人类中引起不可接受的免疫排斥反应。NK-92细胞系的表征公开于WO 1998/49268及美国专利申请公开第2002-0068044号中。NK-92细胞也作为治疗某些癌症的潜在治疗剂被评估。

发明内容

本发明提供具有降低的HLA I类表达的修饰的NK-92细胞、产生这类细胞的方法和使用该修饰的NK-92细胞治疗疾病(例如，癌症) 的方法。

在一个方面，本公开因此提供β-2微球蛋白(B2M)-修饰的NK-92 细胞，其包含抑制β-2微球蛋白的表达的B2M-靶向的改变。在一些实施方式中，B2M-修饰的NK-92细胞的β-2微球蛋白基因经遗传改变以抑制B2M的表达。在一些实施方式中，B2M-修饰的NK-92细胞包含靶向B2M且抑制其表达的一种或多种干扰RNA。在一些实施方式中，由B2M-修饰的NK-92细胞表达的β-2-微球蛋白的量与不具有靶向β-2-微球蛋白的改变的NK-92细胞相比降低至少20％，至少30％，至少50％，至少60％或至少80％。在一些实施方式中，权利要求1 的B2M-修饰的NK-92细胞通过敲低或敲除NK-92细胞中的β-2微球蛋白(例如，使用CRISPR)产生。在一些实施方式中，细胞通过敲除NK-92细胞中的β-2微球蛋白(例如，使用CRISPR)产生。在一些实施方式中，NK-92细胞被另外地修饰以表达包含HLA-E结合肽、 B2M和HLA-E重链的单链三聚体。在一些实施方式中，单链三聚体包含B2M(β2微球蛋白)信号肽、Cw*03前导肽(例如，Cw*0304前导肽)、成熟B2M多肽和成熟HLA-E多肽。在一些实施方式中，Cw*03 前导肽通过柔性接头连接于成熟B2M多肽和/或成熟B2M多肽通过柔性接头连接于成熟HLA-E多肽。一个或两个柔性接头可以包含Gly 和Ser。在一些实施方式中，HLA-E重链包含成熟HLA-E^G氨基酸序列。在一些实施方式中，单链三聚体包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。

在一些实施方式中，B2M-修饰的NK-92细胞(例如，如本文中和之前的段落中所述的)表达至少一种Fc受体或至少一种嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方式中，B2M-修饰的NK-92细胞(例如，如本文中和之前的段落中所述的)表达在细胞表面上的至少一种Fc 受体和至少一种CAR。在一些实施方式中，Fc受体是CD16。在一些实施方式中，CD16多肽是具有成熟形式的158位处的缬氨酸的人 CD16多肽，其对应于包括原始信号肽的人CD16序列的176位。在一些实施方式中，至少一种Fc受体包含编码与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的多肽的多核苷酸序列且包含对应于SEQ ID NO:5的158位的位置处的缬氨酸。在一些实施方式中， Fc受体是FcγRIII。在一些实施方式中，CAR包含FcεRIγ的胞质结构域。在一些实施方式中，CAR靶向肿瘤相关抗原。在一些实施方式中， B2M-修饰的NK-92细胞经修饰以进一步表达细胞因子。在一些实施方式中，细胞因子是白介素-2或其变体。在一些实施方式中，细胞因子靶向于内质网。