[发明专利]酸性α-葡萄糖苷酶变体及其用途

权利要求书

1.一种核酸分子，其编码功能性嵌合GAA多肽，所述功能性嵌合GAA多肽包含融合到功能性GAA多肽的人类α-1-抗胰蛋白酶蛋白的信号肽，例如具有SEQ ID NO：4中示出的氨基酸序列的信号肽，其中所述功能性GAA多肽由与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少85％同一性、优选地至少90％同一性的核苷酸序列编码。

2.权利要求1的核酸分子，其中编码所述功能性GAA多肽的核苷酸序列包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的核苷酸序列。

3.一种核酸构建物，其包含权利要求1或2的核酸分子，所述核酸构建物是包含可操作连接到启动子例如优选地选自α-1-抗胰蛋白酶启动子(hAAT)、甲状腺素运载蛋白启动子、白蛋白启动子和甲状腺素结合性球蛋白(TBG)启动子的肝特异性启动子的所述核酸分子的表达盒，其中所述核酸构建物任选地还包含内含子，特别是选自人类β球蛋白b2(或HBB2)内含子、FIX内含子和鸡β-球蛋白内含子的内含子，其中所述内含子任选地是修饰的内含子例如SEQ ID NO：8的修饰的HBB2内含子、SEQ ID NO：10的修饰的FIX内含子或SEQ ID NO：12的修饰的鸡β-球蛋白内含子。

4.权利要求3的核酸构建物，其优选地以下述顺序包含：增强子；内含子；启动子，特别是肝特异性启动子；编码所述嵌合GAA多肽的核酸分子；以及多腺苷化信号。

5.权利要求4的核酸构建物，其优选地以下述顺序包含：ApoE控制区；HBB2内含子，特别是修饰的HBB2内含子；hAAT启动子；编码所述嵌合GAA多肽的核酸分子；以及牛生长激素多腺苷化信号；所述核酸构建物更特别地包含SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14的核苷酸序列。

6.一种载体，其包含权利要求1至5任一项的核酸分子或核酸构建物，所述载体特别是病毒载体，优选为AAV载体或反转录病毒载体例如慢病毒载体。

7.权利要求6的载体，其是单链或双链自身互补的AAV载体，优选为具有AAV来源的衣壳例如AAV1、AAV2、变体AAV2、AAV3、变体AAV3、AAV3B、变体AAV3B、AAV4、AAV5、AAV6、变体AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10例如AAVcy10和AAVrh10、AAVrh74、AAVdj、AAV-Anc80、AAV-LK03、AAV2i8和猪AAV例如AAVpo4和AAVpo6衣壳或具有嵌合衣壳的AAV载体。

8.权利要求7的载体，其中所述AAV载体具有AAV8、AAV9、AAVrh74或AAV2i8衣壳，特别是AAV8、AAV9或AAVrh74衣壳，更特别是AAV8衣壳。

9.一种细胞，其用权利要求1至2任一项的核酸分子、权利要求3至5任一项的核酸构建物或权利要求6至8任一项的载体转化，其中所述细胞特别是肝细胞或肌细胞。

10.一种嵌合GAA多肽，其由权利要求1或2的核酸分子编码。

11.一种药物组合物，其在可药用载体中包含权利要求1或2的核酸分子、权利要求3至5任一项的核酸构建物、权利要求6至8任一项的载体、权利要求9的细胞或权利要求10的嵌合GAA多肽。

12.权利要求1或2的核酸分子、权利要求3至5任一项的核酸构建物、权利要求6至8任一项的载体、权利要求9的细胞或权利要求10的嵌合GAA多肽，其用作药物。

13.权利要求1或2的核酸分子、权利要求3至5任一项的核酸构建物、权利要求6至8任一项的载体、权利要求9的细胞或权利要求10的嵌合GAA多肽，其用于治疗糖原贮积病的方法中，所述糖原贮积病优选为例如GSDI(冯·吉尔克氏病)、GSDII(庞贝氏病)、GSDIII(科里氏病)、GSDIV、GSDV、GSDVI、GSDVII、GSDVIII和心脏的致死性先天性糖原贮积病，更特别是GSDI、GSDII或GSDIII，甚至更特别是GSDII和GSDIII，最特别是GSDII。