[发明专利]天冬氨酸蛋白酶

说明书

公开了新颖的天冬氨酸蛋白酶、含有这些蛋白酶的组合物及其用途。

本申请要求2016年6月30日提交的PCT/CN2016/087852的权益，所述申请通过引用以其全文并入本文中。

通过引用并入序列表

将于2016年6月23日创建并同时提交的、以大小为60.5KB、名称为“NB40988_pct_seq_listing.txt”的文件形式提供的序列表通过引用以其全文并入本文中。

技术领域

技术领域涉及新颖的天冬氨酸蛋白酶、包含这些蛋白酶的组合物及其用途。

背景技术

蛋白酶(protease)(也称为肽酶或朊酶(proteinase))是一种能够切割肽键的酶。蛋白酶经过多次进化，且不同种类的蛋白酶可以通过完全不同的催化机制进行相同的反应。蛋白酶可以在动物、植物、细菌、古细菌和病毒中找到。

蛋白质水解可通过目前被分为以下六大组的酶实现：天冬氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋白酶、谷氨酸蛋白酶和金属蛋白酶。

天冬氨酸蛋白酶(EC 3.4.23)，也称为天冬氨酸内肽酶和天冬氨酰蛋白酶，其使用与一个或多个催化性天冬氨酸残基结合的活化水分子来水解多肽底物中的肽键。与丝氨酸或半胱氨酸蛋白酶不同，天冬氨酸蛋白酶在切割过程中不形成共价中间体。因此，蛋白水解是一步完成的。通常，它们在活性位点上有两个高度保守的天冬氨酸，并且在酸性pH下最具活性。几乎所有已知的天冬氨酰蛋白酶都受到胃酶抑素的抑制。最新的蛋白酶进化超家族的分类可以在MEROPS数据库中找到[http://merops.sanger.ac.uk；Rawlings,N.D.,Waller,M.,Barrett,A.J.和Bateman,A.(2014)MEROPS:the database of proteolyticenzymes,their substrates and inhibitors.[MEROPS：蛋白质水解酶及其底物和抑制剂的数据库]Nucleic Acids Res[核酸研究]42,D503-D509]。在该数据库中，蛋白酶首先基于结构、机制和催化性残基的顺序按照“族”(超家族)进行分类。在每个“族”中，蛋白酶基于序列相似性被划分为多个家族。每个家族可能含有数百种相关的蛋白酶。

目前已知天冬氨酸蛋白酶的五个超家族(族)，每一个都代表着同一活性位点和机制的独立进化。每个超家族都包含几个具有相似序列的家族。所述族如下：族AA(例如胃蛋白酶家族)、族AC(例如信号肽酶家族)、族AD(例如早老素家族)、族AE(例如GPR内肽酶家族)、和族AF(例如Omptin家族)。

酸性蛋白酶广泛应用于工业领域，包括但不限于食品、动物饲料、酒精制造、葡萄酒生产、酿造、以及织物产品和家居护理。

然而，在许多不同的应用，特别是在食品和饲料工业中，仍然需要蛋白酶。

发明内容

在一个方面，本公开提供了一种重组构建体，该重组构建体包含至少一个在生产宿主中起作用的调控序列，该调控序列有效地连接到编码天冬氨酸蛋白酶的核苷酸序列，该天冬氨酸蛋白酶选自由以下组成的组：

(a)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7具有至少75％序列同一性的天冬氨酸蛋白酶；

(b)与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:9具有至少78％序列同一性的天冬氨酸蛋白酶；以及

(c)与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8具有至少95％序列同一性的天冬氨酸蛋白酶。

生产宿主可以选自由以下组成的组：细菌、真菌、酵母和藻类。在又另一方面，携带天冬氨酸蛋白酶基因的重组构建体可以在生产宿主中经染色体表达或经染色体外表达。