[发明专利]用于检测生物样品中蜱传微生物的方法和固体支持物

说明书

本发明涉及用于检测生物样品中抗体的存在的固体支持物，所述固体支持物包含固定在所述固体支持物上的微生物抗原，其中所述微生物抗原包含至少一种由疏螺旋体(例如伯氏疏螺旋体，埃氏疏螺旋体和伽氏疏螺旋体)的多形性圆形体制备的抗原。本发明还涉及检测生物样品中蜱传微生物的方法，其中所述固体支持物与生物样品接触。

发明领域

本发明涉及莱姆病和其他蜱传疾病的检测。本发明还涉及生物样品中抗体的检测。特别地，本发明提供了用于蜱传疾病(TBD)微生物的多重且多功能检测平台。

发明背景

蜱传微生物(TBM)被定义为通过蜱叮咬传播到宿主的肉眼可见的有毒实体。蜱虫是疾病传播的特殊载体，几乎遍布各大洲，全球物种数量超过850种。欧洲和北美最常见的蜱传疾病(TBD)是由螺旋体疏螺旋体属物种引起的莱姆病^1，2。在全球范围内，莱姆病在80个国家流行，包括27个欧盟国家和中亚地区^3,4。除了疏螺旋体外，还有许多共感染的其他细菌，甚至是病毒，如巴贝虫，立克次氏体，埃里希氏体，巴尔通体，蜱传脑炎病毒等^5,6。美国和欧洲的疾病控制中心分别报告了300,000例和85,000例年度TBD病例。然而，正如世界卫生组织所强调的那样，年度TBD病例总数被严重低估⁷。

对于患者的临床诊断可能具有挑战性，因为TBM感染最初表现为非特异性发热性疾病，伴有或不伴有特定器官系统受累，类似流感样症状^2,5,8。为了进一步使治疗方案复杂化，这些患者常常发生支原体，衣原体，爱泼斯坦-巴尔病毒或其他病毒的继发感染⁶。由于低估，误诊，合并感染和继发感染，治疗不当可能导致严重的临床病况，如疲劳，肌肉/关节疼痛，心血管/认知障碍等的发展⁹。由于诊断不当，患者会出现严重的临床病况，并且治疗会降低他们的生活质量；因此增加了医疗负担^9,10。由于临床症状多种多样且不明确，可靠的诊断方法对于及时准确地治疗患者至关重要^4,6,11,12。

蜱传感染诊断的挑战在于，由于患者活组织检查中存在的活病原体数量较少而难以实施直接的检测方法，例如培养和聚合酶链式反应(PCR)。这导致了阴性结果，并且不排除患者可能患有的活动性感染或疾病的不同阶段^2,5,13。诸如酶联免疫吸附测定(ELISA)的间接方法是有限的抗体测试，其可能在感染或疾病的早期阶段微弱存在或不存在。由于不同细菌物种之间的交叉反应性问题，在这些基于抗体的测定中还出现相当多的假阳性结果。然而，在成功治疗感染后，阳性特异性抗体应答可持续数月或数年。这些现有的方法高达80％不能检测到蜱传疾病第一阶段，并且无法区分急性和慢性感染^4,11。进一步增加挑战的是，大多数基于ELISA的诊断是针对动物而不是人类，并且通常针对一种TBM而不是多种TBM³。

正在使用的诊断工具并没有配备当前的研究结果。近年来，与疏螺旋体的圆形体相关的科学发展¹⁴，疏螺旋体物种形成的重要性^15,16，多种微生物感染¹²和TBD患者中的IgM免疫功能障碍¹⁷对于我们对TBD的临床理解提出了挑战。疏螺旋体的圆形体是疏螺旋体的螺旋体多形性结构之一¹⁴。多年来，疏螺旋体的多形性形式被标记为细胞壁缺陷(CWD)，L-形式，原生质球，原生质体，繁殖体或囊肿^5,8,18-20。直到最近，等人(2015)通过电镜分析得出疏螺旋体为圆形体(RB)而解决了疏螺旋体多形性形态的差异。等人(2015)在人血清中诱导了疏螺旋体RB并且展示了具有完整且柔性细胞壁的球形RB，其代谢不活跃且具有独特生化特征。尽管有关疏螺旋体多形性形态的临床表现已被多次报道，但其在TBD中的致病作用一直存在争议和批评。正在使用的诊断工具无法检测TBD患者的疏螺旋体的圆形体^8,21-25。