[发明专利]抗真菌病原体的新蛋白质

权利要求书

1.一种具有广谱抗真菌活性的新蛋白质，其中所述新蛋白质的多肽序列为SEQ IDNo.2，该序列由核苷酸序列SEQ ID No.1编码。

2.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述新蛋白质具有广谱抗真菌活性并且所述蛋白质适合大规模制备。

3.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述SEQ ID NO.2的氨基酸序列长为111个氨基酸残基，分子量至少为～13kDa，pI约为4.65，pH最佳值约为7.4。

4.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述蛋白质适于广谱抗真菌和食菌活性，其抑制真菌生长并诱导真菌菌丝体中的细胞死亡。

5.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述蛋白质适于防治作物的真菌病。

6.根据权利要求5所述的蛋白质，其中所述真菌病是由立枯丝核菌引起的水稻的纹枯病。

7.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述蛋白质使用重组DNA技术在细菌、酵母、昆虫、植物、人或动物的细胞中表达其编码核苷酸来制备。

8.一种制备由序列SEQ ID No.2表示的具有抗真菌活性的新蛋白质的方法，其中该方法包括以下步骤：

(i)鉴定来自野生唐菖蒲伯克霍尔德氏菌菌株NGJ1的具有抗真菌活性和食菌活性的由Bg 9562基因编码的蛋白质，

(ii)通过发现与抗真菌活性以及规模制备相关的关键残基来分析鉴定的蛋白质的氨基酸序列，并人工设计基因序列以在步骤(i)中鉴定的蛋白质中掺入所需变化并通过基因合成合成所设计的基因，

(iii)在表达载体中过表达步骤(ii)中的进化的蛋白质以获得重组蛋白质，

(iv)通过层析纯化步骤(iii)中过表达的蛋白质，

(v)评估步骤(iv)的纯化蛋白质的所述抗真菌活性，和

(vi)通过反向遗传学技术确立抗真菌活性的蛋白质作用从而从Bg_9562获得新蛋白质。

9.一种从权利要求1所述的新蛋白质制备的具有抗真菌活性的组合物，其中所述组合物还包含选自杏仁油、菜籽油和芝麻油组成的组的油；选自蜂蜡、可可脂和乳木果油的增稠剂，选自包含醇类如鲸蜡醇的组的乳化剂；和水。

10.根据权利要求9所述的组合物，用于广谱真菌病防治，其中所述真菌选自由以下组成的组：立枯丝核菌、芸苔链格孢、稻瘟病菌、苹果黑星病菌、尖孢镰孢、Dedymella sp.、疫霉菌、炭疽菌、Ascochyta rabiei、新壳梭孢、链格孢、酿酒酵母和白色念珠菌。

11.一种制备具有抗真菌活性的组合物的方法，其中所述方法包括以下步骤：

(i)通过在生物反应器中发酵批量制备由序列SEQ ID No.2表示的进化的Bg_9562蛋白质；

(ii)在基于壳聚糖或非壳聚糖的纳米颗粒中封装步骤(i)的发酵产物；

(iii)使用步骤(ii)的封装产物开发水基或油基膏/软膏；和

(iv)将步骤(iii)的产物转化为由淀粉/油制成的包含抗真菌肽的膜。