[发明专利]丝氨酸蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸

权利要求书

1.一种蛋白酶变体，其在对应于SEQ ID NO:3的多肽的位置39、50、57、60、74、81、84、109、110、111、115、117、124、128、142、145、146、154、182、183、187、207、209、210、212、228、267、271、272、274、278、280、294、317、318、320、321、322、328、343、348、362或363处的一个或多个位置处包含修饰，其中该变体具有蛋白酶活性，并且其中该变体与SEQ ID NO:3的成熟多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且其中该变体与SEQ ID NO:3的蛋白酶相比具有增加的热稳定性。

2.如权利要求1所述的变体，其中该变体包含至少一个选自下组的取代和/或缺失或由其组成，该组由以下组成：SEQ ID NO:3的多肽的I39M、I39R、I39L、I39C、S50C、K57R、S60P、S60D、E74W、E81A、E81E、E81K、E81R、I84C、D109N、D109P、D110N、F111P、N115D、N115L、E117D、N124Q、N124L、N124W、G128A、Q142R、Q142W、N145A、N145D、N145E、N145G、N145K、N145Q、N145V、T146A、T146D、T146E、T146W、T146Y、Q154R、Q154V、Q154W、Q154Y、Q182G、Q182R、S183L、S183P、S187L、Q207R、V209L、E212E、I228R、D267N、V271C、S272C、S272R、S272V、G274G、G278S、D280N、S294A、S317A、S317G、S317S、S318N、G320C、K321A、K321G、A322S、T328C、K343C、P348A、T362A、A363C、S318*和S210*，其中该变体具有蛋白酶活性，并且其中该变体与SEQ ID NO:3的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中该蛋白酶是属于S53家族的丝氨酸蛋白酶，并且其中该变体与SEQ ID NO:3的蛋白酶相比具有增加的热稳定性。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的变体，其在对应于SEQ ID NO:3的多肽的位置39、60、74、81、84、109、115、117、142、145、146、154、182、183、187、209、210、212、228、267、272、280、294、317、318、348或362处的位置处包含修饰，其中该变体具有蛋白酶活性，并且其中该变体与SEQ ID NO:3的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中该蛋白酶是属于S53家族的丝氨酸蛋白酶。

4.如权利要求3所述的变体，其中该变体包含一个或多个选自下组的取代和/或缺失或由其组成，该组由以下组成：SEQ ID NO:3的多肽的I39M、I39R、I39L、I39C、S60D、I84C、N115D、N115L、E117D、N145G、N145Q、N145V、N145D、N145K、N145K、N145A、N145E、S183L、S183P、D280N、Q182G、Q182R、E81R、E81K、E81E、E81A、I84C、Q154V、Q142W、Q142R、T146A、T146W、T146Y、T146E、T146D、I228R、D267N、S272V、S272R、E212E、S294A、T362A、E74W、S187L、P348A、D109P、S317A、S317G、S317S、S317A、S318*和S210*，其中该变体具有蛋白酶活性，并且其中该变体与SEQ ID NO:3的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且其中该增加的热稳定性是在55至60摄氏度范围内的温度下孵育30min后测量的增加的残余活性。