[发明专利]具有降低的唾液酸残基的乙酰化率的糖蛋白

说明书

本发明涉及生产与促红细胞生成素受体(EpoR)相互作用或作为其激动剂起作用的糖蛋白的方法或工艺，所述糖蛋白具有改变的效能，其中所述方法或工艺包含所述糖蛋白在适合的表达系统中的异源表达，并且其中提供至少一个步骤，其导致糖蛋白中唾液酸残基的乙酰化率降低(图16)。

本发明涉及具有降低的唾液酸残基乙酰化率的糖蛋白。

唾液酸是神经氨酸的N-或O-取代衍生物的通称，神经氨酸是具有9碳骨架的单糖。在N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)之后，最常见的种类是N-羟乙酰基神经氨酸(Neu5Gc)和O-乙酰化衍生物。

唾液酸广泛分布于动物组织中，并且在较小程度上分布于其他生物体中，从植物和真菌到酵母和细菌，主要在糖蛋白中，其中它们出现在与后者结合的聚糖末端。

聚糖与蛋白质的共价结合代表了一种进化机制，通过该机制可以显著增加蛋白质组的多样性。蛋白质糖基化的多种多样机制进化的情况证明了这种蛋白质修饰的进化益处和总体相关性。这些机制的范围从非酶糖化到复杂的翻译后糖基化，即牵涉几种酶修饰的多步骤和多重-细胞室过程。

图17显示唾液酸家族。一个唾液酸分子可携带一个或几个乙酰基。N-乙酰基-神经氨酸是其中最常见的。

乙酰化唾液酸似乎牵涉许多生物现象。糖结构在蛋白质-蛋白质相互作用中发挥作用，它们可以是折叠成正确的功能性构象的先决条件。它们在发育和恶性过程中的表达显著性和可变性、也作为所谓的“癌胚抗原”的一部分启示它们参与许多生理学病理过程。并不令人惊奇地，损害聚糖部分合成或与蛋白质的连接的遗传缺陷引起多种人类疾病。这些糖结构可以进一步被修饰，从而导入额外的多样化。这种修饰的一个实例是乙酰化。它作为细胞相互作用的有效调节剂的作用将乙酰化与细胞功能的其他生物化学调节例如蛋白质磷酸化或用N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和甲基化修饰分类。

唾液酸的乙酰化显然进一步增加了糖基化的多样性，即连接的糖另外被内源性地酶促修饰。唾液酸是末端聚糖的这种修饰的原型实例，而乙酰化是这种额外修饰的普遍类型。天然存在的唾液酸具有九碳骨架并且可在其所有羟基上乙酰化。这意味着它们可以在C4、C7、C8和C9位被乙酰化。每种唾液酸可以被修饰一次，但也可以是单一唾液酸的多种衍生物，从而生成几种组合模式，特别是对于携带多于一个唾液酸的糖结构。

考虑到糖基化对蛋白质功能的明显重要性和显而易见的显著修饰空间，大量努力通过靶向修饰其聚糖结构来优化蛋白质的治疗性质。最近，这种新一代生物制药的前两个例子获得了上市许可：莫加木珠单抗(mogamulizumab)和阿托珠单抗

然而，糖基化的靶向修饰不限于单克隆抗体。达依泊汀α是一个实例，其中球状蛋白的特征也得到改善，在这种情况下，通过添加两个唾液酸化的碳水化合物链导致延长的效能，即降低的治疗频率。

然而，虽然这些方法中的一些集中于血清半衰期和其他因素的改善，但似乎在狭义上的效能改变尚未成为潜在定性修饰的焦点。对于红细胞生成刺激剂(ESA)尤其如此，其用于增加血液的气体(氧气/二氧化碳)运输能力。

与ESA疗法相关的一个主要风险是死亡率增加。作为最突出的风险，心血管事件发生在血红蛋白(Hb)的高度增加时，这被讨论是由ESA诱发的红细胞(RBC)增加引起的。

本发明的一个目的在于提供一种用于改变治疗糖蛋白效能的新方法。

本发明的另一个目的在于提供一种用于修饰红细胞生成刺激剂以增加其效能的新方法。

本发明的另一个目的在于提供一种用于修饰红细胞生成刺激剂的具有降低的副作用风险和/或死亡率的新方法。

利用本发明的独立权利要求的方法和方式实现这些目的。从属权利要求涉及优选的实施例。

发明概述