[发明专利]离体BITE激活的T细胞

权利要求书

1.产生癌症杀伤T细胞或癌症杀伤T细胞制剂的体外方法，其包括：

(a)提供包含来自患有癌症的受试者的至少一个T细胞的样品；

(b)提供包含至少一个癌细胞的样品；

(c)在足以允许所述至少一个T细胞从所述至少一个癌细胞获得细胞表面标志物的条件和时间下，形成包含所述至少一个T细胞，所述至少一个癌细胞和邻近免疫辅导因子(pICF)的离体反应混合物，由此产生至少一个癌症杀伤T细胞；以及

(d)以下体外步骤中的一个，二个，三个或全部：

i)扩增来自(c)的癌症杀伤T细胞；

ii)选择来自(c)的癌症杀伤T细胞；

iii)富集来自(c)的癌症杀伤T细胞；或

iv)纯化来自(c)的癌症杀伤T细胞。

2.权利要求1的方法，其中pICF在所述制剂中以按重量计0.005％-10％的浓度存在。

3.权利要求1或2中任一项的方法，其中pICF具有提供对所述T细胞的亲和力的第一元件和对所述癌细胞具有亲和力的第二元件，其中所述第一元件结合T细胞并且不结合实质数量的癌细胞，并且其中所述第二元件结合癌细胞并且不结合实质数量的T细胞。

4.权利要求3的方法，其中所述结合T细胞的第一元件包括下列细胞受体中的一种或多种：CD8，CD3，CD4，α/βT细胞受体(TCR)，CD45RO和/或CD45RA。

5.权利要求3的方法，其中所述第二元件结合以下中的一种或多种：CD20，CD30，CD33，CD52，EpCAM，CEA，gpA33，黏蛋白，TAG-72，碳酸酐酶IX，PSMA，叶酸结合蛋白，选自GD2，GD3，或GM2的神经节苷脂，Lewis-Y2，VEGF，VEGFR，αVβ3，α5β1，ErbB1/EGFR，ErbB2/HER2，ERbB3，c-MET，IGF1R，EphA3，TRAIL-R1，TRAIL-R2，RANKL，FAP，生腱蛋白，CD123，CD19，或BCMA。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中pICF包含选自以下的双特异性抗体分子：双特异性免疫球蛋白(BsIgG)，与另外的抗原结合分子可操作地连接的免疫球蛋白，包含通过选自双亲和性重靶向(DART)抗体片段或双特异性T细胞衔接子(BiTE)的接头可操作地连接的两个或更多个scFv片段的双特异性抗体(BsAb)片段，双特异性融合蛋白或BsAb缀合物。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中pICF是选自由以下组成的列表的双特异性抗体：BsMAb CD123/CD3，BsMAb CD19/CD3和EpCAM/CD3。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述癌症杀伤T细胞的扩增包括将癌症杀伤T细胞的数量增加2倍至10⁶倍或更多。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述癌症杀伤T细胞的选择或其制备基于选自以下中的一个或多个的参数：增加的癌细胞杀伤活性，降低的毒性，降低的脱靶效应，增加的生存力，增加的增殖，或有效E∶T比率。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述选择和/或富集步骤(d)包括：使用经荧光标记的化合物，所述经荧光标记的化合物结合i)一种或多种癌症抗原，或扩散到癌细胞膜中或ii)激活的T细胞的一种或多种标志物，或i)和ii)两者；或者使用涂覆有抗体或其片段的珠，所述抗体或其片段结合i)一种或多种癌症抗原或ii)激活的T细胞的一种或多种标志物，或i)和ii)两者。

11.权利要求10的方法，其中所述癌症杀伤T细胞制剂包含胞啃癌症杀伤T细胞，其浓度为所述制剂中细胞总数的至少50％。