[发明专利]荧光探针、荧光检测方法及荧光探针的使用方法

说明书

本发明涉及一种荧光探针，其包含载体分子、和与载体分子结合的荧光色素a和荧光色素b，荧光色素a和荧光色素b的激发波长不同，并且荧光色素a与荧光色素b之间不产生荧光FRET。本发明还涉及一种荧光检测方法，其包含：用上述荧光探针对目标细胞进行标记的工序、和向用荧光探针标记的目标细胞照射激发光，观察来自荧光探针的荧光的工序。本发明还涉及一种荧光探针的使用方法，其包含：利用所述荧光探针对细胞进行荧光标记的工序、利用流式细胞仪或荧光显微镜对荧光标记细胞进行分选的工序、将分选出的荧光标记细胞移植到生物体内的工序、和利用体内荧光成像装置观察生物体内的荧光标记细胞的工序。

技术领域

本发明涉及含有两种荧光色素的荧光探针、荧光检测方法及荧光探针的使用方法。

背景技术

近年来，在癌、发生学的研究领域中，广泛进行使用了小鼠等动物的生物体内的荧光成像分析。移植到小鼠的iPS细胞或ES细胞等干细胞、癌细胞及肝硬化细胞等疾病相关细胞等细胞在移植后、在什么位置进行分化、生长、转移等的信息分析中，荧光成像分析为主要的方法。特别是，为了在维持小鼠等动物的生存的状态下观察移植细胞的进程，目前的情况是只有使用荧光成像分析的方法，其被定位为特别重要的分析方法。

生物体内的移植细胞的荧光成像分析通常通过如下来进行：在移植前预先在体外(in vitro)用荧光探针标记细胞，将该细胞移植到小鼠等生物体内，在体内(in vivo)用荧光成像装置进行观察。例如，专利文献1中记载了将结合有阴离子性卟啉与阳离子性有机烷氧基硅烷及非阳离子性硅烷的含卟啉的复合物用作用于生物体观察的近红外荧光探针。

另一方面，在用荧光探针对规定量的细胞进行标记的情况下，通常，并不是所有的细胞都被荧光探针标记。因此，有时不与荧光探针结合的细胞也被移植到小鼠等的生物体内。在生物体观察用的近红外荧光探针的情况下，目前的情况是无法用荧光显微镜或流式细胞仪等体外荧光成像装置检测荧光，难以确认在体外与近红外荧光探针结合的荧光标记细胞。这是因为体外荧光成像装置和体内荧光成像装置所要求的波长特性不同。在体外荧光成像装置中，一般在激发波长为350～650nm、荧光波长为400～800nm的波长区域内进行分析，在体内荧光成像装置中，一般在激发波长为600～850nm、荧光波长为650～920nm的波长区域内进行分析。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2013-136555号公报

发明内容

发明所要解决的课题

如上所述，适于体外荧光成像分析和体内荧光成像分析的荧光色素的波长特性显著地不同，因此目前，不存在能够用于体外和体内这两方的荧光成像分析的荧光探针。

本发明为了解决上述以往的问题，提供能够用于体外以及体内这两方的荧光成像分析的荧光探针、荧光检测方法以及荧光探针的使用方法。

用于解决课题的手段

本发明涉及一种荧光探针，其特征在于，在包含载体分子、和与所述载体分子结合的荧光色素a和荧光色素b的荧光探针中，荧光色素a的激发波长与荧光色素b的激发波长不同，并且在荧光色素a与荧光色素b之间不产生荧光共振能量移动(FRET)。

所述荧光探针优选为细胞标记用荧光探针，荧光色素a为体外荧光成像用荧光色素，荧光色素b为体内荧光成像用荧光色素。上述荧光探针可以通过特异性结合于细胞表面来标记细胞，也可以通过被摄入到细胞内部来标记细胞。

荧光色素a优选激发波长为350～650nm的范围，荧光色素b优选激发波长为600～850nm的范围。荧光色素a优选为卟啉。荧光色素b优选为吲哚菁绿。

上述载体分子优选为聚硅氧烷。

上述荧光探针也可以用于利用流式细胞仪进行的荧光标记细胞的分选。