[发明专利]产生免疫耐受反应的组合物和方法

说明书

本发明一般涉及用于在对象中产生免疫耐受反应的组合物和方法。具体而言，本发明涉及用于产生免疫耐受反应的包含硫酸酯化多糖和生物活性多肽的组合物。

技术领域

本发明一般涉及用于在对象中产生免疫耐受反应的组合物和方法。具体而言，本发明涉及用于产生免疫耐受反应的包含硫酸酯化多糖和生物活性多肽的组合物。

背景技术

预防细胞同种异体移植排斥是当前细胞治疗策略中的主要挑战。这种排斥是由同种异体移植物反应性效应CD4和CD8 T细胞介导。用免疫抑制药物进行终身治疗减弱同种异体反应和移植排斥，但这与感染和恶性肿瘤的风险增加相关。近年来，已经开发了几种用于预防同种异体细胞移植的免疫排斥的基于生物材料的策略，依赖于细胞包裹在可透过营养物和废产物的膜囊内；然而，所述囊还防止细胞进入和血管形成，因此限制所述装置的尺寸至200μm的氧扩散距离。

理想的细胞移植装置应该能够使其整个体积的血管形成以维持所移植细胞的活力，并且应该促进宿主内的移植物整合。然而，由于经由血液循环的白细胞的大量浸润，装置血管形成通常与同种异体移植排斥的风险增加有关。

转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)是免疫调节细胞因子，其能增强免疫耐受微环境的产生，因为它表现出抑制炎症过程，例如自身免疫性疾病和癌症中明显的炎症过程。在TGF-β富集的环境中，摄取抗原的树突状细胞(DC)变成致耐受性并介导CD4+T细胞分化成抗炎调节性T细胞，其不仅抑制效应CD4+T细胞的产生，而且抑制细胞毒性CD8+T细胞的活化和增殖。

因此，存在用于产生局部免疫耐受微环境同时避免不期望的全身性影响的改进的组合物和方法的需求。

发明简述

一方面，本发明涉及在对象中诱导免疫耐受反应的方法，所述方法包括向所述对象施用包含硫酸酯化多糖和生物活性多肽的组合物，并且其中所述生物活性多肽与所述硫酸酯化多糖的硫酸酯基团非共价相连。在一个实施方案中，所述生物活性多肽是转化生长因子β1(TGF-β1)。

另一方面，本发明涉及在对象中减少或预防同种异体移植排斥的方法，所述方法包括向所述对象施用包含硫酸酯化多糖和生物活性多肽的组合物，并且其中所述生物活性多肽与硫酸酯化多糖的硫酸酯基团非共价相连，从而在所述对象中减少或预防同种异体移植排斥。在一个实施方案中，所述生物活性多肽是转化生长因子β1(TGF-β1)。

本发明进一步涉及在对象中治疗自身免疫疾病或病症的方法，所述方法包括向所述对象施用包括硫酸酯化多糖、第一生物活性多肽和第二生物活性多肽的组合物，其中第一和第二生物活性多肽各自与硫酸酯化多糖的硫酸酯基团非共价相连，并且所述组合物还包含支持基质，其中所述支持基质是选自由多糖、蛋白质、细胞外基质组分、合成聚合物及其混合物组成的组的聚合物。在一个实施方案中，所述第一生物活性多肽是TGF-β1。在一个实施方案中，所述第二生物活性多肽是髓磷脂少突神经胶质细胞糖蛋白(MOG)。

附图说明

图1A显示藻酸-硫酸酯/藻酸支架的装配方法。通过使用钙离子交联90％藻酸(alginate)和10％藻酸-硫酸酯(alginate-sulfate)的混合物。然后将混合物倒在96孔板上并且冷冻干燥以形成大孔支架。TGF-β和血管生成因子与支架中的藻酸-硫酸酯亲和结合。

图1B显示当与藻酸-硫酸酯/藻酸支架亲和结合相较于与原始支架吸附，测量保留的TGF-β百分比的图。通过ELISA检测，在7天的时间内从总输入TGF-β计算所述百分比。

图1C显示使用暴露于0.5ng/ml的TGF-β后40分钟NIH-3T3成纤维细胞系培养物的裂解物的p-SMAD2和p-SMAD3的蛋白质印迹图。