[发明专利]一种口蹄疫病毒样颗粒疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种重组表达载体，其特征在于，含有口蹄疫病毒P12A基因和3C基因；所述口蹄疫病毒P12A基因如序列表中SEQ ID No.1所示；

所述口蹄疫病毒3C基因其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.如权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，通过以下方法制备得到：用Sph I和Hind III对3C基因片段和pFastBac HT-B进行双酶切，酶切后3C基因片段与pFastBac HT-B进行连接，得到pFastBac HT-B-3C；用Rsr II和EcoR I对P12A基因片段和pFastBac HT-B-3C进行双酶切，酶切后进行连接，构建得到pFastBac HT-B-P12A-3C重组表达质粒。

3.含有权利要求1~2任一所述的重组表达载体的宿主细胞，包括：真菌、昆虫、脊椎动物或植物细胞。

4.一种口蹄疫病毒样颗粒，其特征在于，通过以下方法制备得到：（1）将权利要求1~2任一所述的重组表达载体转染昆虫细胞，得到能够表达口蹄疫病毒样颗粒蛋白的昆虫细胞；（2）培养该细胞后，收获细胞和上清，对上清进行超滤浓缩，离心，收集上清液，上清液经离子交换层析、疏水层析或分子筛层析，纯化后获得口蹄疫病毒样颗粒。

5.如权利要求4所述的口蹄疫病毒样颗粒，其特征在于，所述昆虫细胞为sf9、sf21或High5细胞。

6.如权利要求4所述的口蹄疫病毒样颗粒，其特征在于，步骤（2）中，采用截留孔径为200-500nm的中空纤维柱进行培养液澄清，截留孔径选300kDa的超滤浓缩；回收剩余液体进行层析分离VLP。

7.权利要求1~2任一所述的重组表达载体或权利要求3所述的宿主细胞或权利要求4~6任一所述的口蹄疫病毒样颗粒在制备口蹄疫病毒疫苗中的应用。

8.一种口蹄疫疫苗，其特征在于，含有权利要求4~6任一所述的口蹄疫病毒样颗粒。

9.一种制备权利要求8所述疫苗的方法，其特征在于，将口蹄疫病毒样颗粒用不同佐剂吸附后制备成含50-5000μg/ml病毒样颗粒的疫苗。