[发明专利]一种利用光致氧化扩增效应的生物标记物高灵敏定量方法

说明书

本发明揭示了一种利用光致氧化扩增效应的生物标记物高灵敏定量方法。根据本发明实施例的利用光致氧化扩增效应的生物标记物高灵敏定量方法包括下列步骤：对包含下列酶的待测试料进行酶‑底物反应，该酶标记于选自特异性结合于生物标记物的抗体、适配体、核酸的某一个；上述酶‑底物反应后，对产物持续曝光进行光致氧化扩增过程，与此同时，在光致氧化扩增过程中针对选自产物显色量、发光量、荧光量的某一个以上的光特性进行光学测量；针对所测量到的上述光特性把基于时间的变化情况予以指标化；及比较上述指标化步骤所提取的指标和基准试料的指标而把待测试料所含生物标记物的浓度予以定量；在标记于拟检测的生物标记物特异性抗体、适配体、核酸等的酶与底物反应后，对产物持续曝光进行光致氧化扩增过程并且把基于时间的产物的光特性变化情况予以指标化，能以高灵敏度更准确地把低浓度或微量生物标记物予以定量。

技术领域

本发明涉及一种利用光致氧化扩增效应的生物标记物高灵敏定量方法，详细地说，本发明的利用光致氧化扩增效应的生物标记物高灵敏定量方法在标记于拟检测的生物标记物特异性抗体、适配体(Aptamer)、核酸等的酶与底物反应后，对产物持续曝光进行光致氧化扩增过程并且把基于时间的产物显色量、发光量、荧光量之类的变化情况予以指标化，能以高灵敏度把低浓度或微量生物标记物予以定量。

背景技术

检测蛋白质、肽、遗传基因、激素、低分子化合物之类的生物标记物的方法通常可以利用拟检测的生物标记物特异性抗体、适配体、核酸等。

而且，针对利用生物标记物特异性抗体、适配体、核酸等检测出来的生物标记物的浓度进行定量的方法则可以采取酶联免疫吸附测定法(ELISA；enzyme-linkedimmunosorbent assay，EIA；enzyme-linked immunoassay)等。

酶联免疫吸附测定法是一种利用抗原-抗体或抗原-适配体的特异性结合的免疫测定法之一，可以视为蛋白质、肽、激素、低分子化合物之类的抗原的定量测量法。通常在抗原特异性抗体或适配体标记酶后利用其和底物的反应予以定量，针对标记于抗体或适配体的酶与底物的反应所致产物的显色量、发光量、荧光量等进行光学测量后把生物标记物予以定量。通常利用酶标仪(plate reader)、光谱仪(spectrometer)等仪器对待测试料的酶-底物反应的程度进行光学测量，再将其和基准试料的酶-底物反应程度测量值进行比较，然后把生物标记物的量予以定量化。

而且，酶联免疫吸附测定法还能应用于遗传基因生物标记物的检测。亦即，在能够和待测遗传基因生物标记物进行互补结合的核酸上标记酶并且利用和底物之间的反应予以定量，针对标记在核酸的酶与底物的反应所致产物的显色量、发光量、荧光量等进行光学测量并且将其和基准试料的酶-底物反应程度测量值进行比较而得以把生物标记物的量予以定量化。

但是，现有的酶联免疫吸附测定法中如果拟检测的生物标记物的量是微量或低浓度的话，就无法对标记于抗体、适配体、核酸等的酶与底物的反应所致产物的显色量、发光量、荧光量等进行检测，即使能够检测也无法通过极小的检测量准确地定量生物标记物。例如，如图1所示，如果标记抗体的酶的量是微量或低浓度的话，酶-底物反应后能够检测的产物的荧光量也是极小而无法准确地对微量或低浓度抗体进行定量。

发明内容

技术问题

本发明旨在解决上述问题，本发明的目的是提供一种利用光致氧化扩增效应的生物标记物高灵敏定量方法，在标记于拟检测的生物标记物特异性抗体、适配体、核酸等的酶与底物反应后，对产物持续曝光进行光致氧化扩增过程并且把基于时间的产物显色量、发光量、荧光量之类的变化情况予以指标化，能以高灵敏度把低浓度或微量生物标记物予以定量。

技术方案