[发明专利]一种以活性红4为探针的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法

说明书

本发明涉及一种以活性红4为探针的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。本发明提供一种通过十二烷基硫酸钠增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，本发明利用弱酸环境下，活性红4与壳聚糖分子结合形成的缔合物呈电中性，在此基础上加入十二烷基硫酸钠形成三元缔合物，缔合物体积增大，且疏水性大大提高，可导致在结合产物与水之间形成界面而产生一种表面增强的散射效应，从而使共振瑞利散射强度响应值有明显的提升。且在一定浓度范围内，共振瑞利散射强度与壳聚糖含量在一定的浓度范围内呈线性关系，以此作为壳聚糖的定量基础，建立了测定壳聚糖的共振瑞利散射法。本方法测定受壳聚糖的分子量和脱乙酰度的影响，具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好和操作简便等优点。

技术领域

本发明涉及一种以活性红4为探针的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。

背景技术

甲壳素(Chitin)又名几丁质，化学名称为(1，4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡聚糖，它广泛存在于低等植物菌类细胞壁、虾、蟹、昆虫等甲壳动物的外壳中。甲壳素经浓碱处理脱去其中的乙酰基就变成可溶性甲壳素，又称壳聚糖(Chitosan)，其化学名称为(1，4)-2-氨基-2-脱氧-β-D-葡聚糖胺，是自然界中存在的唯一的碱性多糖，可溶于醋酸等无机酸的稀溶液中。壳聚糖及其衍生物一般不与体液或者体内组织发生免疫反应，性质比较稳定，具有良好的生物相容性和生物降解性，同时具有止血、抑菌、抗肿瘤，抗凝血，减肥降脂和增强免疫力等功能。因此，壳聚糖在纺织工业、生物医学、日用环保等领域都有着广阔的应用前景。

随着壳聚糖在食品领域的广泛应用，市面上的壳聚糖保健品参差不齐，配方不一，壳聚糖所占的含量直接影响到其功能的发挥，因此，壳聚糖的准确定量显得十分重要。目前，国内外用于壳聚糖定量分析的方法有分光光度法、高效液相色谱法、电化学法、荧光猝灭法，还有利用阴离子表面活性剂、阴离子染料、金属离子等作为探针的共振瑞利散射法(RRS)等。

共振瑞利散射法应用于壳聚糖定量分析的研究比较少，它是近年来发展起来的一项简便、快速、灵敏的分析技术。虽然目前国内外壳聚糖含量的测定方法很多，但开发出更简便、快速、灵敏度更高的测定壳聚糖含量的新方法成为一种趋势。基于此，本发明提供一种以活性红4为探针运用共振瑞利散射技术测定壳聚糖含量的方法。

发明内容

为了克服现有技术中对于成品中壳聚糖的含量难以定量，操作技术繁琐的技术不足，本发明提供一种通过十二烷基硫酸钠增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，本发明利用弱酸环境下，活性红4与壳聚糖分子结合形成的缔合物呈电中性，在此基础上加入十二烷基硫酸钠形成三元缔合物，缔合物体积增大，且疏水性大大提高，可导致在结合产物与水之间形成界面而产生一种表面增强的散射效应，从而使共振瑞利散射强度响应值有明显的提升。且在一定浓度范围内，共振瑞利散射强度与壳聚糖含量在一定的浓度范围内呈线性关系，以此作为壳聚糖的定量基础，建立了测定壳聚糖的共振瑞利散射法。本方法测定受壳聚糖的分子量和脱乙酰度的影响，具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好和操作简便等优点。

一种以活性红4为探针的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，其包括下述步骤：

1)绘制△I和不同分子量的壳聚糖浓度的标准曲线